双抗体夹心ELISA检测杏仁过敏原Amandin

李明新; 巴巨伟; 刘俊伟; 陆旸

doi:10.13364/j.issn.1672-6510.20240041

天津科技大学学报 ›› 2025, Vol. 40 ›› Issue (02) : 44 -50. DOI: 10.13364/j.issn.1672-6510.20240041

双抗体夹心ELISA检测杏仁过敏原Amandin

李明新, 巴巨伟, 刘俊伟, 陆旸

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摘要

本研究以提取纯化的甜杏仁主要过敏原amandin为目标物，制备高亲和力的抗amandin单克隆抗体。以鼠单克隆抗体为捕获抗体、兔多克隆抗体为检测抗体，通过优化封闭液以及缓冲液pH等条件，建立双抗体夹心ELISA方法检测amandin。该方法的检出限为(0.88±0.08)ng/m L，线性范围为5.86～187.5 ng/m L。该方法与芝麻全蛋白、花生全蛋白、核桃全蛋白以及β-乳球蛋白均无交叉反应，表明特异性良好。添加回收实验中面包、饼干、巧克力回收率的范围为82.16%～112.04%，实际样品的检出限分别为(9.07±0.23)ng/mL、(7.78±0.18)ng/mL和(327.37±0.25)ng/m L，说明能够用于实际样品中amandin的准确定量分析。