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摘要
糖基转移酶(Glycosyltransferase, GT)是一类可糖基化修饰小分子化合物的酶类,可改变受体分子的水溶性、抗逆性等生物学功能。为探究候选糖基转移酶基因的组织表达模式,qRT-PCR检测GT1家族A组中8个糖基转移酶基因在苹果植株不同部位的基因表达水平。结果发现,7个糖基转移酶基因MdUGT91AJ1、MdUGT91AJ3、MdUGT91AJ4、MdUGT91AJ5、MdUGT91AJ6、MdUGT91AJ7和MdUGT91C7在不同组织部位中均有表达,差异较小,而MdUGT91AJ2差异较大。为了异源表达候选糖基转移酶的蛋白,以苹果‘嘎拉’(Malus domestica Gala)cDNA为模板成功克隆了这8个基因,分别将其连接到原核表达载体pGEX-2T中,将阳性重组质粒转化到大肠杆菌(Escherichia coli)BL-21中。经过诱导条件探索,发现不同糖基转移酶的最佳诱导条件如下:MdUGT91AJ1、MdUGT91AJ2、MdUGT91AJ3为20℃,1.0 mmol·L-1 IPTG诱导,培养16 h; MdUGT91AJ4、MdUGT91AJ5、MdUGT91AJ6、MdUGT91AJ7为16℃,0.5 mmol·L-1 IPTG诱导,培养24 h;糖基转移酶MdUGT91C7为20℃,0.75 mmol·L-1 IPTG诱导,培养24 h。总之,本研究检测了GT1家族A组中8个糖基转移酶基因在苹果植株不同部位的基因表达水平,成功构建了其原核表达载体,经诱导纯化后获得了它们的酶蛋白,为下一步糖基转移酶糖基化修饰功能鉴定奠定了基础。
关键词
苹果
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糖基转移酶
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基因克隆
/
蛋白表达
Key words
苹果GT1家族A组中8个糖基转移酶基因克隆及蛋白表达[J].
聊城大学学报(自然科学版), 2025, 38(02): 307-321 DOI:10.19728/j.issn1672-6634.2024090001