铜离子对光合颤绿菌蓝铜蛋白结晶的影响

摘要

蓝铜蛋白(auracyanin, AC)是一种含铜的重要光合电子传递载体。分别获得高质量的光合颤绿菌(Candidatus Viridilinea mediisalina,Cvm)野生型AC蛋白(Cvm-AC)和不结合铜离子的突变体AC蛋白(Cvm-AC-mutant),通过对比两者结晶条件的差异探讨铜离子对Cvm-AC蛋白结晶的影响。首先通过异源表达获得两种目的蛋白，再分别依次通过镍离子亲和层析、阴离子交换柱层析和凝胶过滤层析分离纯化获得高纯度的Cvm-AC和Cvm-AC-mutant蛋白，并使用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳对蛋白的均一性和纯度进行检测；通过使用坐滴法和悬滴法对Cvm-AC蛋白的结晶条件进行筛选和优化，最终获得了质量较好的Cvm-AC蛋白晶体。然而，使用Cvm-AC蛋白的结晶条件无法获得Cvm-AC-mutant的蛋白质晶体，表明铜离子的结合与否可以直接影响Cvm-AC的结晶。

关键词

光合颤绿菌 / Cvm-AC蛋白 / 分离 / 纯化 / 结晶