基于RPA-CRISPR/Cas12a的支原体检测技术在生物药生产中的应用探索

摘要

支原体污染是生物药生产中的重大风险源，严重威胁抗体药物等生物制品的安全性和有效性。传统检测方法因耗时长、灵敏度不足或操作繁琐，难以满足生物制药全流程快速质控的需求。针对这一挑战，本研究基于前期开发的RPA-CRISPR/Cas12a支原体检测技术，进一步拓展了其多场景中应用潜力，并评估了体系的实用性与可靠性。通过预混CRISPR体系优化显著提升操作便捷性，验证其在4℃条件下稳定保存7天且性能无显著衰减，为现场检测提供技术保障。半定量分析实现支原体的快速定量评估。应用测试覆盖生物制药工艺全流程：在上游工艺中，系统可于CHO细胞培养的早期污染预警；在下游纯化步骤，可以进行多步骤污染去除能力监测，突显其高灵敏度优势。此外，该方法还可应用于细胞库、培养基及血清的支原体检测，并在模拟污染实验中展现高可靠性。研究表明，RPA-CRISPR/Cas12a系统兼具快速、灵敏、操作简便及多场景适用性，为生物制药生产中支原体污染过程监测提供了创新解决方案，显著提升了质量控制效率与产品安全性，具有广阔的应用前景。

关键词

支原体 / RPA-CRISPR/Cas12a / 过程分析技术(PAT) / 生物制药 / 过程监测