细胞状态对抗RANKL抗体报告基因法活性检测的影响及方法优化

摘要

报告基因法在抗核因子κB受体活化因子配体(Receptor Activator of Nuclear Factor Kappa-B Ligand, RANKL)抗体(如地舒单抗)生物学活性检测中具有高灵敏度和操作便捷性，但实验常出现剂量-反应曲线拐点阶跃突变(Z型)现象，影响数据可靠性。本研究通过系统分析血清来源、消化时间、pH值等变量，首次揭示稳定表达NF-κB响应元件-荧光素酶的Raw264.7细胞状态是导致非典型Z型拐点的关键因素。实验表明，贴壁培养或胰蛋白酶消化可能改变细胞分化状态，影响信号通路的动态响应，进而引发拐点突变；而采用悬浮状态细胞可消除该现象，优化后曲线恢复典型S型平滑过渡。进一步验证实验显示，优化方法显著提升实验重复性与稳定性。本研究首次明确了稳定表达NF-κB响应元件-荧光素酶的Raw264.7细胞状态对抗RANKL抗体检测体系的关键影响，提出了基于细胞状态控制的方法优化策略，为抗RANKL抗体活性检测的精准化及实验设计优化提供了理论依据与实践方案。

关键词

报告基因法 / 细胞状态 / 生物活性 / 抗RANKL抗体 / 方法优化

基金资助

国家自然科学基金项目(22304067); 上海东方英才项目(CYQN2023031); 山东省自然科学基金项目(ZR2023QB257,ZR2023QB196); 山东省高等学校“青创团队计划”团队(2022KJ111); 光岳青年学者创新团队项目(LCUGYTD 2022-04)资助