哈茨木霉菌对多年连作甜瓜根际土壤酶活性、养分及枯萎病发生的影响

Effects of Trichoderma harzianum on Enzyme Activity， Nutrients and Fusarium Wilt in Rhizosphere Soil of Melon under Continuous Cultivation for Years

摘要

为探明哈茨木霉菌对8年连作土壤栽培甜瓜连作障碍的影响，利用桶栽方式，以未使用哈茨木霉菌为对照（CK），研究哈茨木霉菌对8年连作土壤栽培甜瓜根际土壤酶活性、养分和枯萎病发生的影响。结果表明：与CK相比，哈茨木霉菌DQ002的使用显著提高了薄皮甜瓜根际土壤蔗糖酶、脱氢酶、碱性磷酸酶活性，调节了不同时期脲酶的活性变化，促进了根际土壤pH和电导率的升高。此外，哈茨木霉菌处理降低了根际土壤养分铵态氮、速效磷的质量比，提高了硝态氮的质量比，并降低了枯萎病的发生率。可见，哈茨木霉菌通过调节薄皮甜瓜根际土壤pH、EC以及土壤酶的活性，影响薄皮甜瓜对铵态氮、硝态氮和速效磷的吸收，降低枯萎病的发病率，从而缓解8年连作土壤连作障碍对薄皮甜瓜的伤害。

Abstract

This study investigates the effect of Trichoderma harzianum on the challenges posed by eight years of continuous cultivation of melon. A pot culture experiment was conducted using a control treatment without Trichoderma harzianum （CK） to examine its influence on enzyme activities， nutrient availability， and the occurence of Fusarium wilt in the rhizosphere soil of melon. The results showed that， compared to the CK treatment， the application of Trichoderma harzianum DQ002 significantly enhanced the activities of sucrase， dehydrogenase and alkaline phosphatase in the rhizosphere soil of oriental melon. It also regulated the variations in urease activity over different growth periods and promoted increases in both pH and electrical conductivity （EC） values in the rhizosphere soil. Furthermore， Trichoderma harzianum treatment decreased the levels of ammonium nitrogen and available phosphorus while increasing nitrate nitrogen content， leading to a reduction in the incidence of Fusarium wilt. Notably， the incidence of fusarium wilt was negatively correlated with the activities of sucrose and phosphatase， as well as with the content of nitrate nitrogen in soil. These findings suggest that Trichoderma harzianum modulates the absorption of ammonium nitrogen， nitrate nitrogen， and available phosphorus by regulating pH， EC， and soil enzyme activities in the rhizosphere of oriental melon， thereby reducing Fusarium wilt occurrence and mitigating the detrimental effects of eight years of continuous cropping on oriental melon.

Graphical abstract

关键词

哈茨木霉菌 / 薄皮甜瓜 / 土壤pH / 电导率 / 土壤酶活性 / 枯萎病

Key words

Trichoderma harzianum / oriental melon / soil pH / electrical conductivity（EC） / soil enzyme activity / Fusarium wilt

甜瓜因其独特的香味、清甜的口感而深受人们的喜爱，在我国及世界各地都有大面积种植^[1]。由于常年单一化、不科学的种植方式，使得甜瓜土传病害加剧、土壤生态系统失衡、甜瓜根系有害代谢物积累引起自毒作用从而引发连作障碍^[2-3]，导致甜瓜产量减产，品质下降，连作障碍已成为设施甜瓜生产中的主要瓶颈之一。因此，甜瓜根际土壤的健康状况直接影响其生长发育和产量品质。解决连作障碍所引起的甜瓜植株伤害的策略主要围绕生物防治、化学防治、农业防治、抗病育种等方面展开，而生物防治是近年来广受关注的方式。目前已有大量有益微生物菌剂被开发，并应用于农业生产，取得了良好的效果，其中包括木霉菌（Trichoderma spp.）^[4-5]、芽孢杆菌（Bacillus cohon）^[6]及其他有益微生物^[7]等。

木霉菌是植物病害生物防治过程中应用非常广泛的一类真菌，普遍存在于各种环境中，具有很强的适应性^[8]。大量研究发现，木霉菌能显著改善土壤结构，调节土壤酸碱度（pH）、电导率（EC），提高植物对土壤养分的利用率，抑制病原微生物繁殖，使有益微生物定植于植株根系，提高土壤酶活性进而改善土壤质量^[4-5]；应用木霉菌防治植物病害是减少农药、化肥的使用量和促进绿色植保发展的有效措施^[9-12] 。目前已有多种木霉菌，如绿色木霉（Trichoderma viride）、哈茨木霉（Trichoderma harzianum Rifai）、长枝木霉（Trichoderma longibrachiatum）、棘孢木霉（Trichoderma asperellum）等，经研究报道对病原菌有良好的防治作用^[12]。研究表明，生防木霉菌的防治机理是通过营养和空间竞争作用、重寄生作用、诱导植物产生抗性对病原菌产生抑制作用^[13]。研究发现，黄瓜^[14]、番茄^[15]、辣椒^[16]在连续种植多茬后，土壤脲酶、蔗糖酶、过氧化氢酶、碱性磷酸酶等活性下降明显，导致土壤养分转化受到影响。在施用木霉菌、芽孢杆菌等微生物菌剂后，土壤酶活性明显提升^[17-19]。土壤酶是构成土壤的生物组分之一，主要来源于动植物残体、植物根系分泌物以及土壤微生物活动代谢物，并参与土壤生化反应和营养物质循环和微生物群落结构的变化，与作物生长存在相互影响、相互制约的关系^[20-21]。土壤酶活性易受外界环境影响，能够及时反映土壤微环境情况，且木霉菌对根际微环境的影响也受到土壤酶活性变化的调节^[22-23]。根际微环境在植物生长发育过程中起着至关重要的作用，影响着植物根系对养分的吸收^[17-18]。因此，本研究开展桶栽试验，利用连续种植薄皮甜瓜8 年的土壤栽培薄皮甜瓜，以易感枯萎病的薄皮甜瓜自交系L-2为试验品种，以哈茨木霉菌DQ002浇灌甜瓜植株，调查植株根际土壤酶活性、土壤的养分变化以及甜瓜枯萎病发病率，明确哈茨木霉菌对8 年连作土壤栽培甜瓜生长的调控作用，从而为木霉菌在设施甜瓜栽培中的应用及推动设施甜瓜产业可持续发展提供有效参考。

1 材料与方法

1.1 供试材料

供试甜瓜品种为自交系薄皮甜瓜L-2。供试木霉菌哈茨木霉菌DQ002（Trichoderma harzianum）孢子粉（有效孢子量为2×10⁹/g），均由黑龙江八一农垦大学园艺园林学院靳亚忠教授课题组提供。该菌株能通过竞争、重寄生、抗生方式发挥抑菌作用和促进植株生长功能^[12]。黑色塑料桶（20 cm×20 cm×30 cm）购自农资市场。供试土壤为试验大棚甜瓜连作8年的土壤，土壤为黑钙土（w_铵态氮为1.58 mg/kg，w_硝态氮为6.72 mg/kg，w_速效磷为75.34 mg/kg，w_速效钾为140.8 mg/kg，pH=7.65，EC=233 µS/cm）。于2023年5—9月在黑龙江八一农垦大学园艺园林学院大棚基地开展桶栽试验。

1.2 试验设计

选择饱满度基本一致、无破损的薄皮甜瓜种子，在常温下浸泡8 h，然后用1%的次氯酸钠溶液浸泡15 min，并用清水清洗干净，种子捞出后用消毒的湿润纱布包裹置于培养皿，放在28~30 ℃的恒温箱中进行催芽。催芽24 h后，70%~80%的种子露白后播种于50 孔的黑色穴盘。苗期正常管理，白天保持温度在25~28 ℃，夜间保持温度在18~20 ℃。把连续种植薄皮甜瓜8年的土壤装桶，每桶5 kg，将5 g聚氨酸增效复合肥（12-18-15，山东领翔肥业有限公司）与土壤混合均匀，并在定植后30 d时追施1 次腐植酸水溶肥（N＋P₂O₅＋K₂O≥200 g/L，腐植酸≥30 g/L，奥德雷斯（北京）农业科技有限公司），稀释200 倍，每桶浇灌500 mL稀释后的腐殖酸水溶肥。将3叶1心的幼苗定植于栽培桶中，分为2 组，每组各100 桶。试验设置：T处理为哈茨木霉菌处理（孢子含量为2×10⁹/g），另一组为空白对照（CK，清水处理）。施用木霉菌后每10 d取样1 次，每20 d追施1 次哈茨木霉菌孢子悬浮液（在20、40 d时先取样，之后接着灌木霉菌），即整个试验周期共施用3 次哈茨木霉菌（0、20、40 d），采集6 个时段（10、20、30、40、50、60 d）的土样，并在处理后的第30、40、50、60 天时分别测定甜瓜植株枯萎病发病率。定植缓苗后，在幼苗4 叶1 心时进行处理，将500 g哈茨木霉菌孢子粉（有效孢子量为2×10⁹/g）溶解于50 L水中，每盆根灌500 mL木霉菌孢子悬浮液，CK处理每次根灌500 mL清水，做法同木霉菌处理一致。当甜瓜植株长至20 cm时，进行吊蔓栽培，单蔓整枝，子蔓结瓜。在试验期间管理模式保持一致。对甜瓜根际土壤取样时，把整个根系挖出，去除桶栽表面的土壤，将根系周围的土壤过筛（20 目）收集，每个时期、每个处理取3 桶植株根际土壤混合作为1 次重复，每个处理重复3 次。土壤样品用液氮冷冻后放置在-40 ℃冰柜中保存。

1.3 土壤酶活性和土壤养分测定

采用关松荫^[24] 的方法测定土壤酶活性：土壤脱氢酶活性的测定使用TTC（2，3，5-氯化三苯基四氮唑）分光光度法（485 nm）；土壤脲酶活性的测定使用苯酚钠-次氯酸钠比色法（578 nm）；土壤蔗糖酶活性的测定使用3，5-二硝基水杨酸比色法（508 nm）；土壤碱性磷酸酶活性的测定使用磷酸苯二钠比色法（660 nm）；土壤多酚氧化酶活性的测定使用邻苯三酚比色法（430 nm）。采用鲍士旦^[25]的方法测定土壤养分：土壤硝态氮质量比的测定使用紫外分光光度法；土壤铵态氮质量比的测定使用靛酚蓝比色法；土壤速效磷质量比的测定使用碳酸氢钠浸提-钼锑抗比色法；土壤pH的测定（m_土∶m_水=1∶5）使用pH测定仪，土壤EC值的测定（m_土∶m_水=1∶5）使用电导率测试仪。

1.4 发病率测定

在哈茨木霉菌处理后的第30、40、50、60 天时分别调查发病株数，发病植株的判断参考刘晨^[26]的方法，并依据以下公式计算发病率：发病率=（发病株数/调查总株数）×100%^[26]。

1.5 数据处理与分析

采用Excel 2020和SPSS 25.0软件进行数据处理和统计分析，利用Duncan新复极差法进行数据的显著性分析，利用Origin 2021软件作图。

2 结果与分析

2.1 哈茨木霉菌处理对甜瓜根际土壤酶活性的影响

2.1.1 哈茨木霉菌处理对甜瓜根际土壤脱氢酶和脲酶活性的影响

由图1-A可知，随着时间的推移，甜瓜植株根际土壤脱氢酶的活性呈现先上升后下降再上升的趋势，在第30 天时达到峰值。与CK相比，在甜瓜培养期间每个时期哈茨木霉菌处理的根际土壤脱氢酶活性均高于CK，差异具有统计学意义（P0.05），其中哈茨木霉菌处理10 d时的差异最大。可见，哈茨木霉菌处理促进了植株根际土壤中脱氢酶活性的升高。

由图1-B可知，在甜瓜培养期间，根际土壤脲酶活性呈现上升—下降的变化趋势，哈茨木霉菌处理的土壤脲酶活性在第50 天时达到峰值，而CK的则在第40 天时最高，处理后20、40 d时CK的根际土壤脲酶活性显著高于哈茨木霉菌处理，而在其他时期，哈茨木霉菌处理的植株根际土壤脲酶活性高于CK，两处理之间的差异具有统计学意义（P0.05）。

2.1.2 哈茨木霉菌处理对甜瓜根际土壤蔗糖酶和磷酸酶活性的影响

由图2-A可以看出，随着培养时间的推移，两处理的根际土壤蔗糖酶活性变化趋势均为先上升后下降，且哈茨木霉菌处理的土壤蔗糖酶活性高于CK，差异具有统计学意义（P0.05）；在第30 天时，根际土壤蔗糖酶活性达到最大值，哈茨木霉菌处理的根际土壤蔗糖酶活性高于CK，差异具有统计学意义（P0.05）。这说明接种哈茨木霉菌能显著提高土壤蔗糖酶活性。

由图2-B可知，随着培养时间的推移，两处理根际土壤磷酸酶活性呈现不同的变化趋势。CK的土壤磷酸酶活性呈现先升高后下降的趋势，在第20 天时达到最大值，且高于哈茨木霉菌处理，差异具有统计学意义；而在其他培养时间，哈茨木霉菌处理的土壤磷酸酶活性均高于CK，差异具有统计学意义（P0.05），且在培养到第50天时，土壤磷酸酶活性达到最大值。可见，接种哈茨木霉菌能提高培养后期土壤磷酸酶的活性。

2.2 哈茨木霉菌处理对甜瓜根际土壤养分的影响

2.2.1 哈茨木霉菌处理对甜瓜根际土壤铵态氮质量比和硝态氮质量比的影响

由图3-A可知，植株根际土壤铵态氮和硝态氮的质量比随着培养时间的推移呈现波浪式变化趋势。与CK相比，在培养期间第20、40、60 天时，哈茨木霉菌处理的根际土壤铵态氮质量比低于CK，差异具有统计学意义（P0.05），而在其他培养时间，两者之间无明显差异。由图3-B可知，随着培养时间的推移，在第10、30、60 天时，哈茨木霉菌处理的根际土壤硝态氮质量比高于CK，差异具有统计学意义（P0.05），而在第20、50 天时，哈茨木霉菌处理的根际土壤硝态氮质量比与CK之间的差异不具有统计学意义；但在培养的第40天时，哈茨木霉菌处理的根际土壤硝态氮质量比低于CK，差异具有统计学意义（P0.05）。

2.2.2 哈茨木霉菌处理对甜瓜根际土壤速效磷质量比的影响

由图4可知，在甜瓜培养期间，两处理的根际土壤速效磷质量比均呈波浪式变化趋势，在第30天时质量比最高，在第50 天时质量比最低，整体看CK的根际土壤速效磷质量比呈现降低趋势。与CK相比，在培养的第10、20、40、50 天时，哈茨木霉菌处理的根际土壤速效磷质量比低于CK，且差异具有统计学意义（P0.05），而在第30和60 天时，两处理之间的差异不具有统计学意义。

2.3 哈茨木霉菌处理对甜瓜根际土壤pH和EC的影响

由图5-A可知，随着培养时间的推移，CK处理的根际土壤pH逐渐升高，而哈茨木霉菌处理的呈现升高—降低的趋势。在甜瓜培养期间，除第50天时，其他时间哈茨木霉菌处理的土壤pH均高于CK，且差异具有统计学意义（P0.05），表明哈茨木霉菌处理明显提高了根际土壤pH。由图5-B可知，在甜瓜培养期间，哈茨木霉菌处理显著提高了根际土壤EC，且随着时间推移土壤EC呈现降低趋势，而CK的根际土壤EC变化缓慢，且显著低于哈茨木霉菌处理（P0.05）。这说明哈茨木霉菌的施用可能通过活化根际养分而提高了土壤EC。

2.4 哈茨木霉菌处理对甜瓜枯萎病发病率的影响

由表1可知，甜瓜枯萎病的发病率随着栽培时间的推移逐渐增大，说明8 年连作土壤种植的薄皮甜瓜枯萎病发生严重。与CK相比，在定植后30 d时，哈茨木霉菌处理的甜瓜也发生了枯萎病，其发病率为6.10%，而CK处理的甜瓜枯萎病发病率为18.29%。随着栽培时间的推移，CK的甜瓜枯萎病发生加剧，在栽培60 d时，枯萎病发病率达到90.57%，而哈茨木霉菌处理的甜瓜枯萎病发病率为48.72%，低于CK处理，表明哈茨木霉菌DQ002灌根处理减轻了8 年连作土壤栽培甜瓜枯萎病的发生。本试验表明，连作土壤中土壤酶活性、土壤养分、土壤pH、土壤EC是影响甜瓜枯萎病发生的主要因子。

3 讨论

木霉菌广泛存在于自然界的土壤及植物根、茎、叶等器官当中^[13]，是目前研究最深入、应用最广泛的生防菌类之一。在植物-微生物-土壤互作过程中，木霉菌作为微生物起到“桥梁”的作用。植物的生长发育需要得到土壤中营养物质的供给，但是土壤中的养分由于被土壤吸附与固定，或与土壤相互作用，大部分以化合物的形式微溶或不溶状态存在，这导致了植物根系吸收利用养分的效率降低^[27]。大量研究发现，木霉菌、芽孢杆菌等土壤微生物的分泌物可以降低土壤pH，进而溶解固定于土壤的矿质营养物质^[28-29]，从而有利于植物根系的吸收，促进植物的生长发育。此外，木霉菌还可以提高土壤酶活性，促进土壤养分的转化和供应能力^[29]。本研究表明，施用哈茨木霉菌后土壤铵态氮、速效磷的质量比均低于CK，而硝态氮的质量比仅在培养的第40天时低于CK，原因可能是哈茨木霉菌促进了甜瓜对铵态氮和速效磷的吸收，这与雷娇娇等^[30]对闽楠幼苗的研究结果相符；哈茨木霉菌的施用明显提高了根际土壤EC，而高的EC值可能与土壤中的硝态氮质量比较高有关，同时也可能与提升了土壤中铁、铜、锌等离子的可溶性有关^[31]。可见，哈茨木霉菌的施用能够活化土壤养分，进而促进甜瓜连作土壤栽培甜瓜植株的生长发育。

此外，本研究中哈茨木霉菌处理的根际土壤pH明显高于CK，且对土壤速效磷质量比的提升有一定作用，这与前人研究发现的木霉菌处理降低了土壤pH的结果相反^[28-29]。研究发现，一般情况下微生物分泌的有机酸能降低土壤pH，也会影响土壤EC的变化^[3]。在对青钱柳的研究中，棘孢木霉菌灌根处理提高了pH和基质中全氮、有效磷含量，促进了青钱柳的生长^[32]；在盐胁迫下，哈茨木霉菌的施用降低了植株根区土壤盐浓度，提高了碱解氮含量，但高于CK（清水）处理，而哈茨木霉菌单独处理的土壤pH和EC与CK之间无明显差异，但提高了阳离子交换量^[31]。因此，本研究中哈茨木霉菌的施用提高了土壤pH和EC，这可能与试验所采用的栽培土壤理化性质的本底值有关，也可能是受到了土壤中有效磷含量提高的影响^[32]，其作用机制还需进一步研究。

研究表明，连作导致土壤酶活性降低^[33-34]，但是在施用微生物菌肥后能阻止土壤酶活性的降低^[35] 。魔芋^[36]、苦荞^[37]、广藿香^[38]等作物连作种植多年后，栽培土壤的脲酶、蛋白酶、过氧化氢酶、蔗糖酶、碱性磷酸酶等活性发生明显变化，但是在不同作物连作栽培下，栽培土壤的相关酶活性的变化趋势不同；木霉菌菌剂及其相关有机肥的施用能促进栽培辣椒、甜瓜、西瓜等土壤的酶活性提高，但是木霉菌对栽培不同作物的土壤酶活性的影响存在差异^{[4-5，36-38]}。本研究发现，在连作8 年土壤中栽培薄皮甜瓜，哈茨木霉菌处理的根际土壤脱氢酶、蔗糖酶、脲酶（第20、40 天除外）、磷酸酶活性显著升高。在土壤酶系统中，土壤脲酶和蔗糖酶分别参与土壤中氮和蔗糖的转化，磷酸酶能促进有机磷或无机磷的转化^[3，39]，而土壤脱氢酶参与土壤有机质的氧化分解，且与微生物种群的形成有关，能够反映土壤微生物状况^[40-41]。此外，在小麦^[41]、白菜^[42]、辣椒^[43]的研究中，哈茨木霉菌的施用提高了土壤脱氢酶、蔗糖酶活性，促进了土壤碳素的转化；在甜瓜研究中，减施化肥与有机肥及木霉菌剂配施处理提高了植株根际土壤（20 cm土层）磷酸酶、脲酶、多酚氧化酶的活性，提高了土壤中硝态氮、铵态氮、速效磷和速效钾的含量^[5]，表明哈茨木霉菌通过土壤酶活性的变化调控土壤中氮、磷、钾的有效性，从而促进植物生长。有研究发现，瓜菜连作后土壤氮的过量积累会导致磷和钾的有效利用率降低，造成土壤次生盐渍化^[44-47]。而Liu等^[43]的研究结果表明，木霉菌的施用会促进土壤脲酶活性升高，缓解土壤中氮素积累所导致的盐碱化问题，从而改善土壤连作障碍。本研究中，哈茨木霉菌的施用提高了8 年连作土壤中根际土壤脱氢酶、蔗糖酶、磷酸酶以及脲酶的活性，促进了根际土壤中氮、磷的有效性，实现了缓解连作障碍伤害，这可能与木霉菌能够调节土壤微生物群落结构有关^[48]。

木霉菌与海藻酸或聚谷氨酸协同灌根能够提高草莓的光合作用，促进草莓生长，并提高土壤脲酶活性和对炭疽病的防治率^[49]；也能通过促进植株对营养元素的吸收调节土壤微环境，抑制根际有害微生物繁殖，促进植物生长，抑制病害发生^[50-51]；木霉菌还可以通过竞争、重寄生和抗生的作用抑制枯萎病病原菌的生长，达到防病效果^[52-53]。本研究条件下，哈茨木霉菌处理降低了连作8年土壤中栽培薄皮甜瓜枯萎病的发病率，统计分析表明薄皮甜瓜枯萎病发病率与土壤蔗糖酶活性、磷酸酶活性以及硝态氮的质量比显著负相关。推测可能是木霉菌通过与植株根系互作，刺激了根系海藻素类物质的合成及氨基酸等的代谢发生变化，调节了根际土壤中酶活性和养分的活化，进而促进甜瓜抗枯萎病能力增强，但这还需进一步验证，并从分子生物学的角度解析其机理。

4 结论

哈茨木霉菌的施用能够促进8 年连作土壤栽培薄皮甜瓜根际土壤的pH和EC升高，提高脱氢酶、蔗糖酶、碱性磷酸酶活性和根际土壤的硝态氮质量比，但铵态氮和有效磷的质量比降低；此外，哈茨木霉菌处理明显降低了8年连作土壤中栽培薄皮甜瓜枯萎病的发病率，统计分析表明甜瓜枯萎病的发生与土壤蔗糖酶活性、土壤磷酸酶活性以及硝态氮质量比显著负相关。综上所述，哈茨木霉菌DQ002的施用通过调节甜瓜植株根际土壤pH，影响土壤酶系统和土壤养分的变化，从而增加薄皮甜瓜抗枯萎病的能力，缓解连作障碍造成的甜瓜植株损伤。

参考文献

[1] 李伟，张爱香，江蛟，等.甜瓜蔓枯病病原鉴定及其生物学特性[J].江苏农业学报，2008，24（2）：148-152.

[2] 彭金光，岩吞，廖长宏，等.甜瓜连作障碍成因及防控措施[J].农家参谋，2022（8）：16-18.

[3] 赵欣，王怡霏，王嘉嘉，等.木霉菌对作物及土壤生态环境的影响[J].中国农业科技导报，2023，25（11）：166-172.

[4] 靳亚忠，熊亚男，孙雪，等.化肥减施与木霉菌有机肥配施对辣椒产量、品质及根际土壤酶活性的影响[J].四川农业大学学报，2021，39（2）：198-204.

[5] 熊亚男.化肥减施与有机肥及木霉菌剂配施对薄皮甜瓜品质和肥料利用的影响[D].大庆：黑龙江八一农垦大学，2022.

[6] 郝慧娟，刘洪伟，尹淑丽，等.枯草亚芽孢菌BSD-2的GFP标记及其在黄瓜上的定殖研究[J].华北农学报，2016，31（4）：106-111.

[7] THAMBUGALA K M， DARANAGAMA D A， PHILLIPS A J L， et al. Fungi vs. Fungi in biocontrol： An overview of fungal antagonists applied against fungal plant pathogens[J]. Frontiers in Cellular and Infection Microbiology， 2020， 10：604923.

[8] 杜康武，贺军强，豆鑫，等.不同改良措施对重茬和非重茬果园土壤酶活性的影响[J].北方园艺，2024（1）：76-84.

[9] 李青璞，白建海，姚拓，等.微生物菌剂与氮肥配施对紫花苜蓿生长及土壤性质的影响[J].草地学报，2023，32（1）：314-321.

[10] JIN X， BAI Y， RAHMAN M K U， et al. Biochar stimulates tomato roots to recruit a bacterial assemblage contributing to disease resistance against Fusarium wilt[J]. iMeta， 2022， 1（3）：e37.

[11] - H U E R G A G C A R R O， - P R I E T O S M A Y O， RODRÍGUEZ-GONZÁLEZ Á， et al. Influence of fungicide application and vine age on Trichoderma diversity as source of biological control agents[J]. Agronomy， 2021，11（3）：446.

[12] 陆淼.木霉菌对甜瓜的促生作用与蔓枯病防效的研究[D].大庆：黑龙江八一农垦大学，2020.

[13] 李梅，田莹，蒋细良.植物内生木霉菌研究进展[J].中国生物防治学报，2020，36（2）：155-162.

[14] 金珊，刘雪，陈卓帛，等.有机肥配施生物菌肥对设施黄瓜土壤改良效果[J].农业环境科学学报，2023，42（9）：1995-2003.

[15] 赵阳阳，刘银双，宋瑶，等.设施番茄种植年限对土壤理化性质及微生物群落的影响[J].环境科学，2023，44（12）：6982-6991.

[16] 童芳，李屹，陈来生，等.连作对设施辣椒土壤酶活性和微生物群落结构的影响[J].西北农业学报，2023，32（8）：1231-1239.

[17] 祝静，于存.长枝木霉菌肥对玉米生长、土壤肥力和根际微生物的影响[J].生物技术通报，2022（4）：230-241.

[18] 王义坤，孙琪然，段亚楠，等.三种菌肥对苹果连作土壤环境及平邑甜茶幼苗生长的影响[J].植物营养与肥料学报，2019，25（4）：630-638.

[19] 尹大川，祁金玉，宋瑞清.复合接种褐环乳牛肝菌与绿木霉对樟子松根际土壤生物活性年际变化的影响[J].生态学杂志，2018，37（9）：2637-2641.

[20] 邵文山，李国旗.土壤酶功能及测定方法研究进展[J].北方园艺，2016（9）：188-193.

[21] 耿玉清，王冬梅.土壤水解酶活性测定方法的研究进展[J].中国生态农业学报，2012，20（4）：387-394.

[22] 王丽丽，朱诗君，沈岚，等.微生物菌剂结合改良剂对连作草莓品质和土壤环境的影响[J].中国农学通报，2023，39（23）：39-44.

[23] 刘晴，董爱荣，邓世林，等.降解菌短密木霉对土壤酶活性的影响[J].森林工程，2019，35（3）：9-12.

[24] 关松荫.土壤酶及其研究法[M].北京：中国农业出版社，1986.

[25] 鲍士旦.土壤农化分析[M].3版.北京：中国农业出版社，2000.

[26] 刘晨.嫁接对甜瓜连作障碍的缓解作用研究[D].沈阳：沈阳农业大学，2022.

[27] HALIFU S， DENG X， SONG X S， et al. Effects of two Trichoderma strains on plant growth， rhizosphere soil nutrients， and fungal community of Pinus sylvestris var. mongolica annual seedlings[J]. Forests， 2019， 10（9）： 758.

[28] SOOD M， KAPOOR D， KUMAR V， et al. Trichoderma： The secrets of a multitalented biocontrol agent[J]. Plants， 2020， 9（6）： 762.

[29] FU J， XIAO Y， WANG Y F， et al. Trichoderma affects the physiochemical characteristics and bacterial community composition of saline-alkaline maize rhizosphere soils in the cold-region of Heilongjiang Province[J]. Plant and Soil， 2019， 436（1/2）.

[30] 雷娇娇，于存，田力，等.长枝木霉菌肥优化及其对闽楠幼苗生长、生理及土壤养分的影响[J].生态学杂志，2022，41（3）：473-478.

[31] 赵忠娟，杨凯，扈进冬，等.盐胁迫条件下哈茨木霉ST02对椒样薄荷生长及根区土壤理化性质的影响[J].生物技术通报，2022，38（7）：224-235.

[32] 林权，王舒扬，范文杰，等.不同类型诱导子促进青钱柳生长与生物活性物质积累的效果及机制[J].植物营养与肥料学报，2023，29（5）：961-971.

[33] 王春燕，李晓炜，张雯莉，等.压砂西瓜连作土壤生物学特性和理化性质变化[J].兰州大学学报（自然科学版），2021，57（5）：659-664.

[34] 张冬明，郑道君，曾建华，等.西瓜连作对土壤主要微生物数量、酶活性及果实品质的影响[J].北方园艺，2017（4）：155-158.

[35] 朱诗君，王丽丽，金树权，等.微生物菌剂菌肥对西瓜连作障碍的缓解作用[J].中国农学通报，2023，39（28）：48-53.

[36] 杨敏，裴卫华，董家红，等.魔芋连作对根际土壤微生物数量及酶活性的影响[J].北方园艺，2018（23）：110-115.

[37] 彭艳，江燕，刘代铃，等.有机质和微生物菌剂对苦荞连作农艺性状及土壤酶活性的影响[J].分子植物育种，2023，21（4）：1287-1293.

[38] 刘晓凤，严武平，曹诗佳，等.连作对广藿香根际土壤理化性状和土壤酶活性的影响[J].分子植物育种，2023，21（18）：6164-6170.

[39] 李玉华，邓培渊，雷志华，等.种植地黄对土壤中脲酶、多酚氧化酶及碱性磷酸酶活性的影响[J].西南农业学报，2018，31（5）：1041-1044.

[40] 黄君霞，张荣，徐少卓，等.过硫酸铵配施不同形态木霉菌肥缓解苹果连作障碍[J].植物营养与肥料学报，2021，27（6）：1104-1112.

[41] 刘畅，段京涛，张建夫，等.盐胁迫条件下木霉菌肥对小麦抗病性和土壤酶活性的影响[J].华北农学报，2021，36（S1）：353-360.

[42] SHI L R， ZHENG W， LEI T， et al. The effect of different soil amendments on soil properties and on the morphological and physiological characteristics of Chinese cabbage[J]. Journal of Soil Science and Plant Nutrition， 2021（2）： 1500-1510.

[43] LIU Q M， MENG X H， LI T， et al. The growth promotion of peppers （Capsicun annuum L.） by Trichoderma guizhouense NJAU4742-based biological organic fertilizer： Possible role of increasing nutrient availabilities[J]. Microorganisms， 2020， 8（9）： 1296-1319.

[44] 闫童，赵广中，郭学习，等.种植模式对鲁南地区潮土养分变化趋势的影响[J].中国土壤与肥料，2022（6）：221-227.

[45] 王芳，王晓立，张颖，等.设施蔬菜复种连作对土壤理化性质和生物学特性的影响[J].江苏农业科学，2022，50（7）：214-220.

[46] 张冬明，郑道君，曾建华，等.西瓜连作对土壤主要微生物数量、酶活性及果实品质的影响[J].北方园艺，2017（4）：155-158.

[47] 韩海蓉，李屹，陈来生，等.设施辣椒连作对土壤理化性状、酶活性及微生物区系的影响[J].中国土壤与肥料，2021（3）：237-242.

[48] GAO Z Y， HAN M K， HU Y Y， et al. Effects of continuous cropping of sweet potato on the fungal community structure in rhizospheric soil[J]. Frontiers in Microbiology， 2019， 10： 2269-2280.

[49] 王晓琳，黄洁雪，邬劼，等.生物刺激素协同对草莓炭疽病防治及其生长发育的影响[J].中国生物防治学报，2023，39（1）：149-156.

[50] 王丽花，杨秀梅，张艺萍，等.木霉菌对切花月季根际、根内微生物多样性影响及霜霉病防效的研究[J].中国农学通报，2023，39（10）：69-78.

[51] CONTE E D， MAGRO T DAL， CARLOS DAL BEM L， et al. Use of Trichoderma spp. in no-tillage system： Effect on soil and soybean crop [J]. Biological Control， 2022， 171：104941.

[52] 谷祖敏，毕卉，张兵，等.不同木霉菌株对黄瓜枯萎病菌的拮抗作用[J].西北农业学报，2018，27（3）：426-431.

[53] 赵欣，王怡霏，王嘉嘉，等.木霉菌对作物及土壤生态环境的影响[J].中国农业科技导报，2023，25（11）：166-172.

基金资助

黑龙江八一农垦大学博士启动基金资助项目(XYB201924)

黑龙江八一农垦大学三纵资助项目(ZRCPY202116)

黑龙江省省博士后面上项目(LBH-Z21225)

黑龙江省农业生物经济协同创新推广体系项目