通过干扰FOXO3a转录因子抑制多柔比星诱导MDA-MB-231细胞凋亡的作用研究

摘要

目的 探讨转录因子FOXO3a在多柔比星（Doxorubicin,DOX）诱导三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡过程中的作用，为乳腺癌临床早期诊断和药物研发提供新思路。方法 通过siRNA技术干扰MDA-MB-231细胞中FOXO3a的表达。设未干扰且未加药的细胞为对照组，未干扰且加药的细胞为加药组，干扰且加药的细胞为干扰加药组。通过荧光定量PCR和蛋白质免疫印迹实验确认干扰效率，并检测干扰试剂对细胞活力的影响，确保无细胞毒性后继续实验。随后分别对对照组、加药组和干扰加药组进行MTS增殖实验、Annexin V-FITC/PI凋亡检测、线粒体膜电位变化以及DAPI染色实验。联合DOX处理后，评估干扰FOXO3a对细胞凋亡的影响。结果 3条siRNA序列均能有效抑制MDA-MB-231细胞中FOXO3a的表达，其中siRNA3干扰效率最为显著（P<0.001）。MTS实验结果显示，30μmol/L的DOX为区分加药组与干扰加药组细胞活力差异的最适作用浓度（P<0.001）。流式细胞术结果显示，DOX可显著诱导MDA-MB-231细胞发生凋亡，干扰FOXO3a后细胞凋亡率下降，显著低于加药组（P<0.01）。JC-1染色检测线粒体膜电位变化结果显示，DOX处理的MDA-MB-231细胞中为红色荧光减弱、绿色荧光增强，红/绿荧光比值较对照组相比显著下降（P<0.001）；而干扰FOXO3a后，红色荧光部分恢复，红/绿荧光比值与加药组相比明显升高（P<0.01），提示线粒体膜电位损伤程度有所缓解。DAPI染色结果显示，DOX处理后的MDA-MB-231细胞出现明显的核浓缩、碎裂等典型凋亡特征，干扰FOXO3a后亮蓝色凋亡核的数量明显减少，荧光强度减弱。结论 干扰FOXO3a的表达可显著削弱DOX诱导的MDA-MB-231细胞凋亡，表明FOXO3a可能作为三阴性乳腺癌潜在的治疗靶点。

关键词

FOXO3a / MDA-MB-231细胞 / 细胞凋亡