葫芦素B通过核因子E2相关因子2/溶质载体家族7成员11/谷胱甘肽过氧化物酶4信号通路诱导舌鳞状细胞癌CAL-27细胞铁死亡

摘要

目的 观察葫芦素B（CuB）是否诱导舌鳞状细胞癌CAL-27细胞铁死亡，并探讨其可能的机制。方法 采用不同浓度的CuB（0、5、10、15、20、30µmol/L）处理CAL-27细胞，使用细胞计数试剂盒（CCK）-8法检测细胞增殖活力，并计算半数抑制浓度（IC50）；细胞克隆实验、细胞划痕实验用于检测不同浓度CuB对CAL-27细胞增殖、迁移的影响；采用不同浓度CuB处理CAL-27细胞，分别检测细胞内活性氧（ROS）、Fe²⁺、谷胱甘肽（GSH）、丙二醛（MDA）的含量变化；蛋白印迹法（WB）检测核因子E2相关因子2（Nrf2）、溶质载体家族7成员11（SLC7A11）及谷胱甘肽过氧化物酶4（GPX4）蛋白的表达水平。结果 CCK-8结果显示：5、10、15、20、30µmol/L的CuB能显著抑制CAL-27细胞增殖活力，IC50为13.93µmol/L（P<0.001）。平板克隆实验显示：CuB能够抑制CAL-27细胞的克隆形成能力（P<0.01）。划痕实验显示：葫芦素显著缩短CAL-27细胞的迁移距离抑制迁移能力（P<0.01）。ROS、GSH、MDA及Fe²⁺测定结果显示：与对照组相比，不同浓度CuB干预后CAL-27细胞中ROS、Fe²⁺的荧光强度显著增强，且细胞内GSH含量明显下降，MDA含量则明显上升，诱导细胞氧化损伤，而以上变化可被铁死亡抑制剂铁抑素-1（Ferrostatin-1）逆转（P<0.01）。WB结果显示：不同浓度CuB干预后能够显著下调Nrf2、SLC7A11和GPX4蛋白表达水平（P<0.05），且铁死亡抑制剂Fer-1可逆转Nrf2、SLC7A11、GPX4蛋白表达（P<0.05）。结论 CuB可诱导舌鳞状细胞癌CAL-27细胞发生铁死亡，其机制可能与CuB通过调节Nrf2/SLC7A11/GPX4信号通路有关。

关键词

葫芦素B / 铁死亡 / 舌鳞状细胞癌 / 核因子E2相关因子2/溶质载体家族7成员11/谷胱甘肽过氧化物酶4信号通路