平喘宁通过TRPM8/PKC/NF-κB信号通路缓解冷刺激加重的人支气管上皮细胞炎症作用机制研究

摘要

目的 探讨平喘宁（PCN）通过瞬时受体电位melastatin家族成员8/蛋白激酶C/核因子-κB（TRPM8/PKC/NF-κB）信号通路对缓解冷刺激加重的人支气管上皮细胞炎症的作用机制，以此阐发平喘宁治疗寒哮的科学内涵。方法 选用人支气管上皮细胞16HBE作为研究对象，用流式细胞术检测18℃培养不同时间的16HBE细胞的Ca²⁺表达水平，选择Ca²⁺水平较高的时间段组作为模型组；采用细胞增殖与活性检测试剂盒（CCK-8）法检测TRPM8离子通道的特异性抑制剂（BCTC）和PCN冻干粉对16HBE细胞的活性影响，以筛选出作用于16HBE细胞的适宜条件的浓度和时间。将细胞分为对照组、18℃冷刺激组（模型组）、18℃+BCTC组（BCTC组）、18℃+PCN冻干粉组（PCN组）、18℃+BCTC+PCN冻干粉组（BCTC+PCN组）。流式细胞术测量各组细胞内Ca²⁺浓度变化；qRT-PCR测定各组TRPM8、PKC、NF-κB mRNA的表达水平；免疫荧光标记法检测各组磷酸化PKC、磷酸化NF-κB抑制因子（IκB）的蛋白含量；ELISA法检测各组细胞炎症因子肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-13（IL-13）的含量变化。结果 与对照组比较，模型组的Ca²⁺浓度显著升高（P<0.01）,TRPM8、PKC、NF-κB p65 mRNA表达水平显著升高（P<0.01），磷酸化IκB、磷酸化PKC表达水平显著升高（P<0.01），促炎因子TNF-α、IL-13表达水平显著升高（P<0.01）。与模型组比较，PCN组的Ca²⁺浓度显著降低（P<0.01）,TRPM8、PKC、NF-κB p65 mRNA表达水平显著降低（P<0.01），磷酸化IκB、磷酸化PKC表达水平显著降低（P<0.01），促炎因子TNF-α、IL-13表达水平显著降低（P<0.01）。与BCTC组相比，PCN组的Ca²⁺浓度均显著降低（P<0.01）,NF-κB p65 mRNA表达水平显著降低（P<0.05）,TRPM8、PKC mRNA表达水平降低，但差异无统计学意义（P>0.05），磷酸化IκB、磷酸化PKC表达水平显著降低（P<0.01），促炎因子TNF-α、IL-13表达水平显著降低（P<0.01）;BCTC+PCN组的Ca²⁺浓度均显著降低（P<0.01）,TRPM8、PKC、NF-κB p65 mRNA表达水平显著降低（P<0.01），磷酸化IκB、磷酸化PKC表达水平显著降低（P<0.01），促炎因子TNF-α、IL-13表达水平显著降低（P<0.01）。结论 平喘宁可能通过调节TRPM8/PKC/NF-κB信号通路减轻冷刺激加重的人支气管上皮细胞炎症。

关键词

平喘宁 / 瞬时受体电位melastatin家族成员8 / 蛋白激酶C / 核因子-κB / 哮喘