复方蛇龙胶囊对单侧输尿管梗阻大鼠肾纤维化抑制作用及机制研究

摘要

目的 在体内肾纤维化模型研究复方蛇龙胶囊（Compound Shelong Capsules,CSC）对肾小管上皮-间充质转化（epithelial mesenchymal transition,EMT）的调控作用，以及对Wnt4/β-catenin信号通路的影响，为慢性肾脏病（chronic kidney disease,CKD）肾纤维化治疗提供实验依据。方法 采用单侧输尿管梗阻（unilateral ureteral obstruction,UUO）法建立肾纤维化大鼠模型。将SD大鼠随机分为空白组（Control组）、假手术组（Sham组）、造模组。造模组行UUO手术后，将大鼠随机分为模型组（UUO组）、阳性药物对照组[LP组，7.5 mg/（kg·d）]、复方蛇龙胶囊高剂量组[CSC-H组，1.5 g/（kg·d）]、复方蛇龙胶囊中剂量组[CSC-M组，0.75 g/（kg·d）]、复方蛇龙胶囊低剂量组[CSC-L组，0.375 g/（kg·d）]。手术24 h后给药，1次/d，连续给药14 d。检测血清中肌酐（creatinine,Cr）、血尿素氮（blood urea nitrogen,BUN）的含量；留取患侧肾脏在光镜电镜下观察病理改变；Western blot、荧光定量PCR检测患侧肾脏α-平滑肌肌动蛋白（alpha smooth muscle actin,α-SMA）、上皮型钙黏蛋白（epithelial cadherin,E-cadherin）、Wnt4和β-catenin的表达水平。结果 与UUO组比较，LP组、CSC-H组和CSC-M组Cr水平降低（P<0.05,P<0.01）,CSC-H组和CSC-L组BUN水平降低（P<0.05,P<0.01）。患侧肾脏观察HE染色结果可知各给药组病变程度均有一定改善；天狼星红染色结果可知各给药组红染程度有所减轻；透射电镜结果各给药组肾小管上皮细胞水肿程度减轻。与UUO组比较，LP组、CSC-M组和CSC-L组α-SMA蛋白表达水平显著降低（P<0.01）;CSC-M组E-cadherin蛋白表达水平增加（P<0.05）;CSC-M组Wnt4蛋白表达水平降低（P<0.05）;LP组和CSC-H组β-catenin蛋白表达水平显著降低（P<0.01）。与UUO组比较，CSC-H组α-SMA mRNA表达水平下降（P<0.05）;CSC-H组、CSC-M组、CSC-L组E-cadherin mRNA表达水平显著增加（P<0.01）；各给药组Wnt4 mRNA表达水平下降（P<0.05,P<0.01）;LP组、CSC-H组、CSC-M组β-catenin mRNA表达水平下降（P<0.05,P<0.01）。结论 CSC可能通过抑制Wnt4/β-catenin信号通路的激活，抑制肾纤维化中肾小管EMT进程，对肾纤维化有明显改善作用。

关键词

复方蛇龙胶囊 / 肾纤维化 / 肾小管上皮-间充质转化 / Wnt4/β-catenin