基于MLCK/MLC信号通路探讨四逆散对溃疡性结肠炎小鼠肠上皮屏障的调节作用

摘要

目的 基于MLCK/MLC信号探讨四逆散对溃疡性结肠炎小鼠结肠上皮屏障的调节作用。方法 C57BL/6小鼠按体质量随机分为对照组（CON），模型组（TNBS），四逆散低（SND-L）、高（SND-H）剂量组，采用三硝基苯磺酸（2,4,6-trinitro-benzene-sulfonic acid,TNBS）与无水乙醇1∶1比例混合液灌肠建立小鼠溃疡性结肠炎模型，比较各组小鼠体质量变化；FITC-右旋糖酐渗透试验检测小鼠结肠通透性；HE染色观察结肠的组织学变化；实时荧光定量PCR检测小鼠结肠黏膜中的细胞因子TNFA、IL-1b、IL-6、IL-17 mRNA的表达；Western blotting检测小鼠结肠黏膜中MLCK、p-MLC、occludin、PUMA蛋白的表达。结果 与CON组相比，TNBS组小鼠体质量下降，结肠变短；小鼠结肠管腔粗细不均，粪便不成形或集结成块状，伴有充血或出血；组织学观察小鼠结肠黏膜完整性破坏、炎细胞浸润，大小不等的溃疡面，部分腺体消失；小鼠结肠FITC-右旋糖酐渗透性增加；TNFA、IL-1b、IL-6、IL-17 mRNA表达升高；MLCK、p-MLC、PUMA蛋白表达量显著升高，occludin蛋白的表达下降。与TNBS组相比，四逆散组小鼠体质量下降比例减小、结肠变长；小鼠结肠FITC-右旋糖酐渗透性降低；小鼠结肠黏膜炎细胞浸润减轻，部分腺体恢复，溃疡面积减小；小鼠结肠黏膜中TNFA、IL-1b、IL-6、IL-17 mRNA表达降低；MLCK、p-MLC、PUMA蛋白表达量下降，occludin蛋白的表达升高。结论 四逆散有减轻小鼠溃疡性结肠炎的作用，并可认为是与抑制小鼠结肠黏膜中MLCK、p-MLC、PUMA蛋白表达，升高occludin蛋白的表达，改善小鼠肠屏障功能相关。

关键词

四逆散 / 溃疡性结肠炎 / 肠上皮屏障 / 肌球蛋白轻链激酶 / 紧密连接