加味麻杏石甘汤治疗铜绿假单胞菌肺炎大鼠疗效及对NADPH氧化酶-依赖性NETs的调控作用

摘要

目的观察加味麻杏石甘汤对铜绿假单胞菌（PA）肺炎大鼠的疗效及对NADPH氧化酶-依赖性NETs的调控作用。方法选取雄性SD大鼠160只，随机分为空白组32只和造模组128只。造模组采用气管滴注法建立PA肺炎模型。建模后，所有大鼠随机分为模型组、中药组、模型+肽酰基精氨酸脱亚胺酶4（PAD₄）抑制剂组和中药+PAD₄抑制剂组，每组32只。造模前，模型+PAD₄抑制剂组和中药+PAD₄抑制剂组予腹腔注射PAD₄抑制剂（Cl-脒）3 d；造模后，空白组、模型组和模型+PAD₄抑制剂组予0.9%氯化钠溶液灌胃，中药组和中药+PAD₄抑制剂组予等量中药浓缩煎剂灌胃。记录并评估所有大鼠一般状态，分4个时点（造模后6 h、12 h、24 h、72 h）取肺组织，每个时点每组取8只；采用HE染色观察病理改变；采用菌落计数法和酶联免疫法检测PA菌落数，瓜氨酸化组蛋白H₃（Cit H₃）、弹性蛋白酶（NE）-DNA复合物、PAD₄和NADPH氧化酶的量。结果（1）各组大鼠一般状态和肺组织病理评分均以中药组最低，中药+PAD₄抑制剂组次之，模型+PAD₄抑制剂组最高。（2）各组内PA菌落计数逐渐减低，差异有统计学意义（P<0.05）；中药组在6 h和72 h时菌落数显著低于模型+PAD₄抑制剂组和模型组（P<0.05）。（3）NETs标记物（Cit H₃和NE-DNA）的量，中药组和中药+PAD₄抑制剂组内均呈上升再下降趋势；二者在6 h和12 h，中药组显著高于空白组和模型+PAD₄抑制剂组（P<0.05）;72 h，中药组Cit H₃水平显著低于模型组（P<0.05）。（4）组内PAD₄和NADPH氧化酶的量在中药组和中药+PAD₄抑制剂组差异均无统计学意义（P>0.05），前者呈下降趋势，后者为上升再下降趋势；12 h，与模型+PAD₄抑制剂组比较，中药组二者水平均显著增高（P<0.05）;72 h，与模型组比较，中药组二者水平均显著降低（P<0.05）。结论加味麻杏石甘汤治疗PA肺炎大鼠疗效显著，其可通过NADPH氧化酶-依赖性途径双向调控肺组织NETs；肺炎形成期促进NETs，增强PMNs杀菌效应，消退期抑制NETs，减轻炎性损伤。

关键词

加味麻杏石甘汤 / 铜绿假单胞菌 / 肺炎 / 中性粒细胞胞外陷阱 / NADPH氧化酶