五味子乙素通过调控mTOR/TFEB通路抑制非酒精性脂肪性肝病细胞模型脂质堆积作用及机制研究

摘要

目的 利用哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）激活的非酒精性脂肪性肝病（non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD）细胞模型探讨并验证五味子乙素（Sch B）通过调控mTOR/转录因子EB(TFEB)通路抑制脂质堆积的作用机制。方法 利用高效液相色谱法（HPLC）测定Sch B纯度；建立游离脂肪酸（FFA）刺激的HepG2细胞模型，并将细胞分为模型组、Sch B(50μmol/L)组、MHY1485(5μmol/L)组和MHY1485+Sch B组。采用微管相关蛋白1A/1B-轻链3(LC3)自噬双标腺病毒感染检测自噬流变化；采用油红O染色法检测细胞脂质水平；采用Western-blot法检测蛋白表达水平；采用免疫荧光检测TFEB的核转位；采用比色法检测细胞脂肪酸β氧化产物β-羟基丁酸（β-HB）含量。结果 与模型组相比，Sch B可提高NAFLD细胞自噬流，并能调控自噬关键蛋白mTOR、p70、UNC-51样自噬激活激酶1(ULK1)磷酸化水平以及Beclin-1、LC3B-Ⅱ和p62表达水平，而mTOR激动剂MHY1485干预显著抑制Sch B调控上述自噬相关蛋白表达的作用。Sch B降低TFEB Ser122磷酸化表达，并促进TFEB入核，上述作用均被MHY1485干预逆转。同时，Sch B减少FFA刺激下HepG2细胞脂质堆积，增加β-HB含量，提高脂肪酸β氧化关键酶过氧化物酶体酰基辅酶A氧化酶1(ACOX1)、长链脂酰辅酶A脱氢酶（ACADL）、中链脂酰辅酶A脱氢酶（ACADM）和3-羟甲基戊二酰辅酶A合酶2(HMGCS2)蛋白表达水平，MHY1485显著减弱Sch B上述作用。结论 Sch B能通过调控mTOR/TFEB通路诱导NAFLD细胞自噬并促进脂肪酸β氧化，从而抑制肝细胞脂质堆积。

关键词

五味子乙素 / mTOR/TFEB通路 / 脂质堆积 / 自噬 / 脂肪酸β氧化 / HepG2细胞