疏肝健脾方通过PERK/eIF2α/ATF4/CHOP通路调节腹泻型肠易激综合征大鼠内脏高敏感机制研究

摘要

目的 探讨疏肝健脾方对腹泻型肠易激综合征（diarrhea-predominant irritable bowel syndrome,D-IBS）大鼠内脏敏感性的调节作用。方法 取1日龄雄性SD大鼠随机分为正常组、造模组和药物组，除正常组外，其余采用母婴分离联合束缚应激的方法进行造模。造模结束后，药物组给予疏肝健脾方灌胃，连续14 d。实验结束后，应用腹壁回撤反射（abdominal withdrawal reflex,AWR）评分及腹外斜肌肌电图曲线下面积（electromyography area under curve,EMG AUC）测定内脏敏感性；检测粪便含水量变化；取材后，实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-PCR）法测定各组大鼠结肠组织胶质细胞纤维酸性蛋白（GFAP）、中枢神经特异蛋白（S100β）mRNA水平变化；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组大鼠结肠组织中GFAP、S100β、磷酸化蛋白激酶R样内质网激酶（p-PERK）、蛋白激酶R样内质网激酶（PERK）、磷酸化真核翻译起始因子2α激酶（p-eIF2α）、真核翻译起始因子2α激酶（eIF2α）、活化转录因子4(ATF4)、C/EBP同源蛋白（CHOP）的蛋白表达水平。结果 与正常组比较，模型组粪便含水量明显升高（P<0.01）,AWR评分和EMG AUC增加（P<0.05或P<0.01），大鼠结肠组织中GFAP、S100β mRNA和蛋白表达水平升高（P<0.01）,p-PERK、p-eIF2α、ATF4、CHOP蛋白表达水平升高（P<0.01）；与模型组比较，药物组大鼠粪便含水量明显降低（P<0.01）,AWR评分和EMG AUC降低（P<0.05或P<0.01），结肠组织中GFAP、S100β mRNA和蛋白表达水平降低（P<0.01）,p-PERK、p-eIF2α、ATF4、CHOP蛋白表达水平降低（P<0.01）。3组大鼠PERK、e IF2α蛋白表达差异无统计学意义（P>0.05）。结论 疏肝健脾方能够改善D-IBS大鼠内脏敏感性和粪便含水量，其作用机制可能与抑制PERK/eIF2α/ATF4/CHOP通路有关。

关键词

疏肝健脾方 / 腹泻型肠易激综合征 / 内脏敏感性 / PERK/eIF2α/ATF4/CHOP通路