基于JNK信号通路探讨miR-129-5P对椎间盘退变作用机制研究

摘要

目的 探讨miR-129-5p通过JNK信号通路对椎间盘退变（intervertebral disc degeneration,IVDD）大鼠炎症和髓核细胞凋亡的影响。方法 选取清洁级SD健康雄性大鼠30只，体质量（300±50） g，随机分为对照组（n=15）和IVDD模型组（n=15）。采用RT-PCR技术检测椎间盘退变组织中miR-129-5p和脂肪酸合成酶（fatty acid synthase,Fas） mRNA的表达。同时，采用Pearson方法分析两个指标之间的相关性。检测外周血中炎症因子白细胞介素-1(IL-1)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平。采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的TUNEL法检测髓核细胞的凋亡率。从椎间盘退变组织中提取髓核细胞进行原代培养，随后用miR-129-5p抑制剂及模拟物转染细胞，分别抑制及过表达miR-129-5p（即miR-129-5p抑制剂组和miR-129-5p模拟组），并采用免疫印迹法检测JNK1、JNK2和Fas蛋白表达变化。结果 与对照组相比，IVDD模型组中miR-129-5p mRNA的表达明显下调，而Fas mRNA表达明显上调（P<0.05）。Pearson方法相关分析显示，miR-129-5p与Fas mRNA的表达呈负相关（r=-0.75,P<0.05）。IVDD模型组血清TNF-α、IL-6、IL-1水平均显著高于对照组（P<0.05）。TUNEL检测结果显示，IVDD模型组的细胞凋亡率（60.6%）明显高于对照组（2.5%）(P<0.05)。免疫印迹结果显示，与对照组相比，IVDD模型组的JNK1、JNK2和Fas蛋白表达显著升高（P<0.05）。然而，与对照组相比，mi R-129-5p模拟组显著下降（P<0.05）。而miR-129-5p模拟组JNK1、JNK2和Fas蛋白表达水平较对照组显著降低（P<0.05）,mi R-129-5p抑制剂组JNK1、JNK2和Fas蛋白表达水平较对照组显著回升，与miR-129-5模拟组呈现相反趋势。结论 mi R-129-5p通过JNK信号通路在IVDD大鼠模型中显著下调，其过表达表现出良好的抗炎和抗凋亡作用，为防治椎间盘退变提供了理论依据。

关键词

miR-129-5p / JNK信号通路 / 椎间盘退变 / 细胞凋亡