丹蒌方干预线粒体氧化应激调控P2X7R/NLRP3信号通路作用机制研究

摘要

目的 旨在探讨丹蒌方干预线粒体氧化应激调控P2X7R/NLRP3信号通路的作用机制。方法 采用丹蒌方75%乙醇提取物干预氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导的RAW264.7巨噬细胞泡沫化。通过荧光探针技术检测丹蒌方对RAW264.7巨噬细胞线粒体形态的影响；通过JC-1试剂盒检测丹蒌方对RAW264.7巨噬细胞线粒体膜电位水平的影响；采用三磷酸腺苷（ATP）检测试剂盒检测RAW264.7巨噬细胞的ATP水平。采用蛋白免疫印迹（Western blot）和实时荧光定量PCR(RT-PCR)技术检测P2X7R/NLRP3信号通路的基因和蛋白水平。结果 丹蒌方能改善ox-LDL诱导的RAW264.7细胞的线粒体形态。与模型组相比，当给予不同浓度丹蒌方（100、200、400μg/mL）干预后，丹蒌方各剂量组线粒体膜电位显著增加（P<0.05或P<0.01），细胞内ATP水平均有不同程度升高（P<0.05或P<0.01）；丹蒌方各剂量组P2X7R mRNA和Toll样受体4(TLR4)mRNA的表达水平降低（P<0.05或P<0.01），丹蒌方400μg/mL剂量组NLRP3 mRNA降低明显（P<0.05）；丹蒌方各剂量组P2X7R、NLRP3、TLR4、热休克蛋白90(HSP90)、天冬氨酸蛋白水解酶-1(Caspase-1)和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-1前体（proCaspase-1）的表达水平降低（P<0.05或P<0.01）。结论 研究表明丹蒌方可能通过干预线粒体氧化应激调控P2X7R/NLRP3信号通路。

关键词

丹蒌方 / RAW264.7巨噬细胞 / P2X7R/NLRP3 / 氧化低密度脂蛋白