柴胡皂苷d通过调控Rev-erbα-NLRP3通路抗肝纤维化的机制研究

摘要

目的 柴胡皂苷d（saikosaponin-d,SSd）是一种源自中药柴胡的生物活性化合物，已被证明可抑制NLRP3炎性小体的表达，从而表现出抗纤维化特性。肝脏生物钟基因Rev-erbα（nuclear receptor subfamily/group D member 1）被发现可以调节NLRP3以减轻炎症性疾病。该研究旨在探究SSd在肝纤维模型中对Rev-erbα-NLRP3通路的具体调节机制。方法 （1）体内实验，使用四氯化碳（carbon tetrachloride,CCl₄）混合液构建C57BL/6小鼠肝纤维化模型，腹腔注射小鼠SSd进行药物干预，6周后处死收集肝脏组织。通过Masson、Sirius Red染色、免疫组织化学检测观察各组小鼠肝纤维化程度。RT-PCR、Western Blot检测肝组织Rev-erbα、NLRP3炎性体及下游炎症因子IL-18、IL-1β的表达。（2）体外实验中，使用转化生长因子-β1（transforming growth factor-β,TGF-β1）作用24 h诱导LX-2细胞活化，CCK8实验检测LX-2细胞活力，免疫荧光检测各组细胞α-平滑肌肌动蛋白（alpha-smooth muscle actin,α-SMA）的表达，荧光定量PCR（RT-PCR）、蛋白质免疫印迹（Western Blot）检测肝组织Rev-erbα、NLRP3炎性体及下游炎症因子IL-18、IL-1β的表达。结果 （1）Masson、Sirius Red染色及免疫组化结果发现，模型组小鼠肝脏胶原纤维沉积明显，α-SMA、胶原蛋白Ⅰ（collagen 1,COL-1）、TGF-β1的表达量增加（P<0.001），而SSd药物干预后可逆转上述效应，具有明显抗纤维化作用。RT-PCR和Western-Blot检测提示，模型组肝组织Rev-erbα表达降低，NLRP3炎性体及下游炎症因子IL-18、IL-1β表达增加，而SSd干预后可以显著上调Rev-erbα的表达，抑制NLRP3炎性体通路（P<0.01）。（2）CCK8检测发现，模型组细胞活力增强，SSd组细胞活力减弱（P<0.001）；免疫荧光检测提示，模型组细胞绿色荧光表达加强，α-SMA的表达增强，SSd组细胞绿色荧光减少，α-SMA表达减少；Western-Blot、RT-PCR检测显示，模型组细胞Rev-erbα表达减少，NLRP3炎性体及下游炎症因子IL-18、IL-1β表达增加（P<0.05）;SSd干预后可以显著上调Rev-erbα的表达，抑制NLRP3炎性体通路（P<0.01）。结论 SSd通过上调Rev-erbα的表达，抑制NLRP3炎性体通路，从而发挥抗肝纤维化作用。

关键词

柴胡皂苷d / Rev-erbα/NLRP3通路 / 肝纤维化