平喘宁通过UPR信号通路改善寒哮大鼠气道炎症机制研究

摘要

目的 探讨平喘宁通过非折叠蛋白反应（unfolded protein response,UPR）信号通路抑制内质网应激（endoplasmic reticulum stress,ERS）“细胞毒性”的机制以及对寒哮大鼠气道形态学及肺组织中蛋白二硫键异构酶（PDIA2）、核因子E2相关因子2(Nrf2)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)mRNA和激活转录因子6(ATF6)mRNA表达水平的影响。方法 将105只无特定病原体（SPF）级雄性SD健康大鼠随机分为空白组，模型组，平喘宁低、中、高剂量组，地塞米松组，桂龙咳喘宁组。以卵清蛋白及寒冷箱刺激实验大鼠复制大鼠寒哮模型，造模21 d后，空白组、模型组予以等量0.9%氯化钠溶液灌服，地塞米松组予以地塞米松片溶于0.9%氯化钠溶液的药液0.405 mg/（kg·d）灌胃给药，桂龙咳喘宁组予以桂龙咳喘宁片溶于0.9%氯化钠溶液的药液0.405 g/（kg·d）灌胃给药，平喘宁高、中、低剂量组分别予以平喘宁汤剂14.578、7.289、3.645 g/（kg·d）不同剂量灌胃给药。灌胃28 d后，在末次卵清蛋白激发后，予以解剖大鼠取出肺组织。取材后行苏木精-伊红（HE）染色法观察大鼠肺组织的病理改变；应用反转录聚合酶链式反应（RT-PCR）法、蛋白质免疫印迹（Western blot）法、酶联免疫吸附测定法（ELISA）分别检测ATF6 mRNA、GRP78 mRNA和PDIA2、Nrf2以及白细胞介素-17A(IL-17A)、白细胞介素-1β(IL-1β)的表达水平。结果 HE染色：模型组大鼠的支气管黏膜褶皱增多，管腔狭窄；其他5组药物干预治疗组大鼠的病理形态学参照模型组均有不同改善。ELISA检测结果：参照模型组，其他5组药物干预治疗组大鼠肺泡灌洗液中IL-17A、IL-1β的表达水平明显降低（P<0.05）;RT-PCR法检测：参照空白组，肺组织的GRP78 mRNA和ATF6 mRNA蛋白表达以模型组升高更为显著（P<0.01）；参照模型组，药物干预治疗组的5组大鼠肺组织中的GRP78 mRNA和ATF6 mRNA蛋白表达均有明显下调（P<0.01）。Western blot检测：参照空白组，肺组织中的PDIA2蛋白表达以模型组升高更为显著（P<0.01）,Nrf2蛋白表达以模型组下降更为显著（P<0.01）；参照模型组，药物干预治疗组的5组大鼠肺组织中的PDIA2蛋白表达均有明显下调（P<0.01）,Nrf2蛋白表达均有明显升高（P<0.01）。结论 平喘宁通过UPR信号通路抑制ERS的“细胞毒性”从而调节寒哮大鼠肺组织中PDIA2、Nrf2、ATF6 mRNA及GRP78 mRNA表达，抑制气道炎症，缓解气道重塑，使寒哮大鼠哮喘症状趋于好转。

关键词

平喘宁 / 寒哮 / UPR信号通路