探讨固本通络方基于细菌脂多糖介导的肠B细胞激活对Gd-IgA1的影响

摘要

目的 探讨固本通络方对IgA肾病小鼠肠道细菌脂多糖（LPS）和糖基化缺陷IgA1(Gd-IgA1)的干预及肾保护作用。方法 将36只雄性小鼠分为正常对照组、模型组、固本通络方低剂量组、固本通络方中剂量组、固本通络方高剂量组、依立托仑组。实验采用ddY小鼠构建IgA肾病动物模型，将模型组和各药物组进行造模，中药干预各组分别予以固本通络方免煎颗粒低（13.2 g/kg）、中（26.4 g/kg）、高（52.8 g/kg）3种不同剂量药液灌胃给药，正常对照组和模型组小鼠给予0.9%氯化钠溶液灌胃（10 mL/kg），依立托仑组予以腹腔注射依立托仑药液，各药物组每天给予药物1次，连续8周。干预4周、8周后，测定各组24 h尿蛋白定量；8周测定血清及肠道黏膜LPS、IgA、GdIgA1水平，观察肾脏病理染色及右肾IgA沉积情况，实时荧光定量PCR检测Cosmc基因表达，Western blot法测定Cosmc蛋白表达及IgA肠道菌群特异性，流式细胞术检测肠道B淋巴细胞活化率及分泌IgA前体B淋巴细胞比率，对肠道黏膜组织LPS水平与B细胞活化率及IgA前体B细胞比率行相关性分析。结果 固本通络方可降低24 h尿蛋白定量水平及血清肌酐水平（P<0.05）。HE染色发现，与模型组相比，固本通络方用药组肾小球系膜细胞、内皮细胞及基质增生显著减少，肾小球系膜区IgA沉积显著改善；血清及肠道黏膜LPS水平检测发现，与模型组比较，各中药干预组均能降低小鼠血清和肠道黏膜组织LPS、Gd-IgA1和IgA水平（P<0.05）；降低B细胞活化率及IgA前体B细胞比率（P<0.05）,qRT-PCR和Western blot结果显示固本通络方能够显著降低小鼠粪便培养中菌落蛋白表达水平，上调Cosmc蛋白和Cosmc基因表达水平（P<0.05）。LPS水平与B细胞活化率及IgA前体B细胞比率均呈正相关（P<0.05）。结论 固本通络方能有效降低IgA肾病小鼠蛋白尿及血清肌酐水平，减轻肾脏病理损伤及肾小球系膜区IgA沉积，其作用可能和固本通络方降低IgA肾病小鼠血清及肠道LPS水平，降低B淋巴细胞活化率，Cosmc表达上调相关。

关键词

固本通络方 / IgA肾病 / 糖基化缺陷IgA1 / 肠道细菌脂多糖