蒙成药安神补心六味丸多维鉴定研究

摘要

目的 建立蒙成药安神补心六味丸组成药材基原系统化的鉴定方法。方法 通过高通量测序技术对蒙成药安神补心六味丸进行总DNA的提取，并对其COI及ITS2序列进行PCR扩增，双端测序后进行序列的整理和聚类分析，并与组成安神补心六味丸中牛心的COI序列，木香、丁香、广枣、肉豆蔻药材的ITS2序列进行测序的结果利用邻接法构建系统树。利用薄层色谱方法以正己烷-石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯-冰醋酸（6∶2∶3∶0.2）为展开剂。展开后烘箱烘干，置紫外光灯（254 nm）下检视。最后对蒙成药安神补心六味丸进行光学显微鉴定观察，确定其显微特征，并将显微特征与组成中药显微特征进行对应。结果 基于对蒙成药安神补心六味丸的ITS2序列进行高通量测序后得到高质量序列共138 633条，经过比对与安神补心六味丸组成药味相关的序列共584条，分别为木香（Aucklandia lappa）、南酸枣（Choerospondias axillaris）、丁香（Eugenia caryophyllata），均为木香、广枣、丁香药材的正品植物来源。在新鲜牛心中成功提取到COI序列，但未提取到安神补心六味丸成药及干燥牛心的COI序列，木香、丁香、广枣、肉豆蔻的ITS2序列成功扩增，扩增的ITS2序列与高通量测序比对后获得的OTU代表序列在系统树与木香、丁香、广枣分别聚为一支。安神补心六味丸与枫香脂及对照药材在相同条件下，薄层色谱同一处出现斑点。在对成药进行显微鉴定后发现与组成药味一致的显微特征。结论 结果表明以ITS2序列作为条形码，利用高通量测序的ITS2序列技术为主要鉴别手段，结合薄层色谱及对蒙成药显微特征观察，可以对安神补心六味丸中6种中药的基原进行准确的鉴别。

关键词

高通量测序技术 / 安神补心六味丸 / 蒙成药 / 中药鉴定 / 薄层色谱法 / 显微特征