关白附炮制前后对缺血性中风沙鼠药效学和代谢组学的影响

摘要

目的 研究关白附生品及其炮制品对沙鼠缺血性脑中风的保护作用及对尿液代谢物的影响。方法 将36只沙鼠随机分成空白组（CG）、模型组（MG）、阳性药组（PG）、生关白附组（RA）、蒸关白附组（SA）和姜矾制关白附组（GA），每组6只，除空白组沙鼠外，其余各组采用右侧单侧结扎沙鼠颈动脉造成中风模型。造模成功后，关白附给药组分别灌胃对应的饮片全粉混悬液（0.586 mg/g），阳性药组灌胃脑络通颗粒混悬液（0.390 mg/g），空白组灌胃生理盐水，共给药14 d。分别采用Longa评分法、氯化三苯基四氮唑（TTC）染色法、酶联免疫法检测关白附生品及其炮制品对神经功能学评分、脑组织梗死面积、氧化应激水平、炎症因子表达；采用超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱法（UHPLC-Q-Orbitrap-MS）分析空白组、模型组、阳性药组、生关白附组、蒸关白附组和姜矾制关白附组沙鼠尿液样品；采用多元统计方法对数据进行处理，筛选差异代谢物；采用京都基因与基因组百科全书（KEGG）数据库结合Metabo Analyst 5.0软件对筛选出的差异代谢物进行代谢通路分析。结果 关白附及其炮制品可显著改善脑组织梗死面积；明显降低脑组织和血清中丙二醛（MDA），白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)活性（P<0.05），明显升高超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽（GSH）、一氧化氮（NO）活性（P<0.05）；代谢组学研究发现L-脯氨酸（L-Proline）、核黄素（Riboflavin）、白三烯D4(Leukotriene D4)、7-甲基黄嘌呤（7-Methylxanthine）等112种差异代谢物可作为缺血性脑中风潜在生物标志物，涉及核黄素代谢、嘧啶代谢、嘌呤代谢等14条代谢通路。生关白附回调了其中的核黄素代谢、嘧啶代谢等4条代谢通路；蒸关白附回调了其中的核黄素代谢、嘧啶代谢、精氨酸和脯氨酸代谢等5条代谢通路；姜矾制关白附回调了其中的咖啡因代谢和乙醛和二羧酸代谢2条代谢通路。结论 通过比较药效学实验结果发现蒸制关白附效果较好，并明确了生品和炮制品对缺血性脑中风潜在生物标志物调节作用的异同。

关键词

关白附 / 炮制品 / 沙鼠 / 缺血性脑中风 / 代谢组学 / 多元统计分析 / 生物标志物