补阳还五汤对脑缺血后12/15-脂氧合酶及相关炎性产物影响

摘要

目的 观察补阳还五汤对脑缺血再灌注后12/15-脂氧合酶（12/15-LOX）及下游相关代谢产物的影响。方法 将雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、补阳还五汤组和12/15-LOX抑制剂PD146176组。假手术组只分离组织和剥离血管，模型组建立大鼠大脑中动脉栓塞（middle cerebral artery occlusion,MCAO）模型，补阳还五汤组于造模术后给予补阳还五汤16 g·kg-1灌胃，2次/d,PD146176组于造模术前30 min给予PD14617610 mg·kg-1皮下注射（同补阳还五汤组做阳性对照）。缺血再灌注后6 h、24 h、48 h和72 h运用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测脑组织12/15-LOX的表达水平；免疫荧光（IF）法观察大鼠脑组织中12/15-LOX蛋白与神经元标记物（NeuN）、小胶质细胞标记物（Iba1）及星形胶质细胞标记物（GFAP）的共定位；酶联免疫吸附（ELISA）法检测12/15-LOX抗炎代谢产物消退素D1(RvD1)的含量，以及促炎代谢产物12-羟基廿碳四烯酸（12-HETE）和15-羟基廿碳四烯酸（15-HETE）的含量；免疫荧光法检测髓过氧化物酶（MPO）的表达，反映炎症细胞浸润程度。蛋白免疫印迹法检测脑组织白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-10(IL-10)表达水平。结果 与假手术组比较，模型组在脑缺血再灌注不同时间点12/15-LOX表达均升高（P<0.01），与模型组比较，补阳还五汤组在脑缺血再灌注后6 h、24 h、48 h、72 h 12/15-LOX表达均降低（P<0.05或P>0.05）。12/15-LOX与NeuN和Iba1共定位重合较多，与GFAP共定位基本无重合。与假手术组比较，模型组RvD1含量降低（P<0.01）,12-HETE和15-HETE含量升高（P<0.01）,MPO和IL-6表达升高（P<0.01）,IL-10表达降低（P<0.01）；与模型组比较，PD146176组和补阳还五汤组RvD1含量升高（P<0.05,P<0.01）,12-HETE和15-HETE含量降低（P<0.01）,MPO表达减少（P<0.01）,IL-6蛋白表达降低（P<0.05,P<0.01），补阳还五汤组IL-10蛋白表达升高（P<0.01）。结论 补阳还五汤可能通过抑制12/15-LOX表达而增加抗炎产物RvD1，降低促炎产物12-HETE和15-HETE，以减轻脑缺血再灌注后炎症损伤。

关键词

补阳还五汤 / 12/15-脂氧合酶 / 脑缺血再灌注 / 炎症