蔗糖异构酶的GST融合表达和酶学性质

摘要

为提高重组蔗糖异构酶的可溶性表达量并改善其酶学性质，通过融合GST标签技术对源自Klebsiella sp. LX3的蔗糖异构酶SIase进行表达和改性。以大肠杆菌BL21（DE3）为表达宿主，分别对N/C端融合GST标签的融合酶进行诱导表达获得可溶性蛋白，利用亲和层析技术对重组融合酶进行分离纯化获得纯酶。对融合酶进行酶学性质表征，结果显示，GST-SIase和SIase-GST纯酶的最适反应温度均为40℃,最适反应pH均为6.0。动力学结果显示，GST-SIase对底物蔗糖的K_m为（137.6±5.7） mmol/L,k_cat/K_m为（6.41±0.15） L/（mmol·s）;SIase-GST对底物蔗糖的K_m为（159.5±11.8） mmol/L,k_cat/K_m为（7.06±0.56） L/（mmol·s）。产物特异性分析结果显示，融合酶转化蔗糖的主产物均为异麦芽酮糖，随着转化反应温度的提高，产物中海藻酮糖比例降低，单糖比例提高。利用融合GST标签技术提高了重组SIase的可溶性表达，有利于其在工业上的规模化制备和应用。

关键词

蔗糖异构酶 / GST标签 / 异麦芽酮糖