N-脱甲基酶电子转移受体蛋白CdnD及其Rieske型[2Fe-2S]结构域的功能表征

摘要

通过对咖啡因降解菌ParaburkholderiacaffeinilyticaCF1中咖啡因降解相关基因簇上的N-脱甲基酶电子转移受体蛋白基因cdnD对应的CdnD蛋白进行异源表达、纯化及酶活力测定,确定其功能。对CdnD酶性质研究发现,其较同家族其他氧化还原酶多了一个Rieske型[2Fe-2S]结构域。为研究这一结构域在N-脱甲基过程中的功能,敲除了CdnD的Rieske型[2Fe-2S]结构域,构建敲除突变株CdnDΔD1,并研究了其对N₁-脱甲基酶CdnA与N₇-脱甲基酶CdnC活性的影响。结果表明,CdnDΔD1与CdnA共同作用可脱去底物的N₁-甲基,而与Cdn C和Cdn E协同作用不能脱去底物的N₇-甲基,因此确定Cdn D的Rieske型[2Fe-2S]结构域在N₇-脱甲基过程中起到电子传递结构域的作用。

关键词

咖啡因 / N-脱甲基酶 / Rieske型[2Fe-2S] / 电子转移受体蛋白