Paraburkholderia caffeinilytica CF1基因敲除体系的构建及转化条件优化

刘思佳; 高子晴; 李宪臻

doi:10.19670/j.cnki.dlgydxxb.2025.0503

大连工业大学学报 ›› 2025, Vol. 44 ›› Issue (05) : 325 -331. DOI: 10.19670/j.cnki.dlgydxxb.2025.0503

Paraburkholderia caffeinilytica CF1基因敲除体系的构建及转化条件优化

刘思佳, 高子晴, 李宪臻

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摘要

为建立Paraburkholderia caffeinilytica CF1敲除体系，基于Red/ET同源重组技术在野生型菌株中分别导入协助质粒，利用重叠延伸PCR构建带有四环素抗性基因的敲除盒，并导入野生型菌株中实现目的基因的敲除，在四环素抗性平板上进行多轮筛选得到阳性敲除株并测序验证。采用单因素试验优化协助质粒选择、感受态细胞制备时间、电转缓冲液类型、重组片段浓度以及敲除菌株复苏时间等菌株CF1的基因敲除条件，以实现在菌株CF1中可高效敲除目的基因。本实验建立的敲除体系，还可用于Paraburkholderia属其他菌株目的基因的敲除，为研究Paraburkholderia属菌株的基因功能提供高效的遗传操作体系。