Paenibacillus sp. LX16中菊粉内切酶InuB的异源表达及酶学性质表征

摘要

在高效菊粉降解菌Paenibacillus sp. LX16基因组上定位了一条菊粉降解基因簇，其中inuB被注释为糖苷水解酶32家族成员，推测其为菊粉降解酶，通过异源表达、纯化及酶活力测定确定InuB-His₆为一种菊粉内切酶。InuB-His₆酶学性质表征结果显示，InuB-His₆的最适反应温度为30℃,最适反应pH为7.0,能够较稳定地存在于pH 7.0～11.0的环境中；Ca²⁺、Mn²⁺和Mg²⁺对InuB-His₆的催化活性有显著的促进作用，而Cu²⁺、Zn²⁺、Fe²⁺、Fe³⁺对InuB-His₆却有显著的抑制作用。动力学参数测定结果表明，InuB-His₆的最适底物为菊粉，最大反应速率为108.44μmol/（L·min）,米氏常数为6.73 mmol/L。离子色谱分析确定菊粉三糖为InuB-His₆水解菊粉的主产物，占总产物的90%以上。研究证实InuB是一种新型的菊粉内切酶，其对菊粉在室温条件下展现出高效的催化活性，且水解产物相对单一。

关键词

菊粉 / 低聚果糖 / 菊粉内切酶 / 菊粉三糖