毕赤酵母中糖基化修饰对持续性内切葡聚糖酶SmCel5A的影响

王曦泽; 王梓懿; 陈晓艺

doi:10.19670/j.cnki.dlgydxxb.2026.0103

大连工业大学学报 ›› 2026, Vol. 45 ›› Issue (01) : 27 -34. DOI: 10.19670/j.cnki.dlgydxxb.2026.0103

毕赤酵母中糖基化修饰对持续性内切葡聚糖酶SmCel5A的影响

王曦泽, 王梓懿, 陈晓艺

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摘要

将来源于生孢噬纤维菌Sporocytophagasp.CX11的持续性内切葡聚糖酶SmCel5A在毕赤酵母X-33中异源表达，质谱鉴定出其Asn258位点存在N-糖基化修饰。为研究糖基化修饰对SmCel5A-pPICZαA-X33催化性能的影响，构建了突变体SmCel5A-N258D-pPICZαA-X33，并在毕赤酵母中进行表达。酶学性质表征结果表明，与SmCel5A-pPICZαA-X33相比，去糖基化修饰后的SmCel5A-N258D-pPICZαA-X33对羧甲基纤维素钠的酶活力下降了95%，对微晶纤维素和滤纸的酶活力也分别下降了75%和50%；最适pH由7.0变为6.0，在碱性条件下稳定性下降；最适温度由40℃变为35℃且温度稳定性较差，说明Asn258位点的糖基化修饰在维持SmCel5A的催化活性、温度稳定性及耐碱性等方面具有重要作用。