十字花科黑腐病菌全局转录后调控蛋白RsmA抑制胞外蛋白酶产生

摘要

胞外蛋白酶、胞外淀粉酶和胞外纤维素酶是十字花科黑腐病菌（Xanthomonas campestris pv.campestris,Xcc）的重要致病因子，它们的表达受到严格的调控。本实验室之前的研究发现，在Xcc8004菌株中，编码全局转录后调控蛋白RsmA的基因rsmA缺失导致胞外淀粉酶和胞外纤维素酶产量显著下降，但不影响胞外蛋白酶的产量。因此认为，RsmA正向调控胞外淀粉酶和胞外纤维素酶的产生，而不调控胞外蛋白酶的产生。为了进一步明确RsmA是否参与胞外蛋白酶的表达调控，本研究构建了rsmA的过量表达株OErsmA,检测了其胞外蛋白酶产量，并和带有空的过表达载体的野生型菌株（WT/pB）的胞外蛋白酶产量进行了比较。结果发现，OErsmA的胞外蛋白酶产量比WT/pB的显著下降，证明RsmA具有抑制胞外蛋白酶产生的功能。Northern杂交结果显示，主胞外蛋白酶基因prtA的mRNA积累量在OErsmA和WT/pB中没有明显差异。而凝胶阻滞实验（electrophoretic mobility shift assay, EMSA）结果显示，（His）₆-RsmA能够与prtA mRNA的SD序列（shine-dalgarno sequence）区域特异结合，预示RsmA通过抑制prtA mRNA的翻译起始（而不是转录）来负调控prtA的表达，从而抑制胞外蛋白酶的产生。

关键词

十字花科黑腐病菌(Xcc) / RsmA / 胞外蛋白酶 / prtA