通过免疫共沉淀和蛋白质谱鉴定与拟南芥DSP1互作的蛋白

沈敏; 徐道博; 彭美玲; 卢嘉怡; 李一博; 苏元; 彭雪艳; 刘云峰

doi:10.13417/j.gab.043.000387

基因组学与应用生物学 ›› 2024, Vol. 43 ›› Issue (03) : 387 -399. DOI: 10.13417/j.gab.043.000387

通过免疫共沉淀和蛋白质谱鉴定与拟南芥DSP1互作的蛋白

沈敏, 徐道博, 彭美玲, 卢嘉怡, 李一博, 苏元, 彭雪艳, 刘云峰

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摘要

拟南芥(Arabidopsis thaliana)DSP1(defective in snRNA processing 1)蛋白是DSP复合物的主要成员，其参与snRNA转录和剪切成熟，并在植物生长发育的多个方面发挥重要作用。本研究利用在线平台分析了DSP1蛋白的理化性质，并预测了DSP1蛋白的二级结构和高级结构。在全长DSP1蛋白无法在细菌表达系统中诱导的情况下，通过无缝克隆技术成功构建包含DSP1蛋白N端(DSP1-N)的重组蛋白表达载体，并且成功纯化了GST-DSP1-N重组蛋白，进一步制备了DSP1的特异性多克隆抗体。通过免疫共沉淀和液相色谱串联技术，共鉴定出45个潜在的与DSP1互作的蛋白，后续的功能聚类分析结果暗示DSP1蛋白可能通过蛋白质代谢、核酸结合活性等方面发挥生物学功能。本研究可为进一步揭示DSP1蛋白在植物中的功能提供研究目标和方向。