马铃薯StSN2信号肽缺失对其定位及蛋白互作的影响

摘要

StSN2属于马铃薯（Solanum tuberosum L.）Snakin/GASA（gibberellic acid-stimulated arabidopsis）蛋白家族，其N端具有信号肽，C端具有12个保守的半胱氨酸残基，主要在植物生长发育和逆境胁迫响应方面发挥重要调控作用。为了明确StSN2蛋白N端信号肽区域对其蛋白亚细胞定位及蛋白互作的影响，本研究首先通过信号肽预测及PCR扩增，获得含信号肽的StSN2基因片段和N端信号肽缺失的StSN2△_SP片段，长度分别为315 bp和243 bp。其次，通过酶切连接方法将StSN2△_SP基因片段连接在亚细胞定位载体上，获得融合蛋白YFP-StSN2△_SP。瞬时表达实验结果发现，N端信号肽缺失后的StSN2△_SP蛋白的亚细胞定位发生了变化，只定位在细胞核。最后通过同源重组方式将StSN2以及StSN2△_SP分别构建到酵母诱饵载体上，并与pGADT7-SnRK1α进行酵母双杂交实验。结果显示，StSnRK1α与StSN2共转化酵母细胞后，其细胞不能在四缺培养基中生长，而StSnRK1α与N端信号肽缺失的StSN2△_SP共转化酵母细胞后，其细胞能在四缺培养基中生长并显色，说明StSN2信号肽缺失后对其亚细胞定位及蛋白互作均有影响。本研究为StSN2蛋白的生物学功能研究提供了理论依据，为进一步完善该基因在马铃薯块茎休眠的功能研究奠定了实验基础。

关键词

马铃薯 / StSN2 / 信号肽 / 亚细胞定位 / 酵母双杂交