LAD1在食管鳞癌发生发展中的作用及其分子机制

摘要

本研究旨在揭示锚定细丝蛋白基因ladinin-1(LAD1)对食管鳞癌(esophageal squamous carcinoma, ESCC)细胞增殖、迁移、侵袭和细胞凋亡的影响及其可能的作用机制。对ESCC组织及癌旁组织进行转录组测序并结合生物信息学数据库分析，发现LAD1在ESCC组织中高表达，通过RT-qPCR验证LAD1在ESCC细胞系中的表达。收集31例ESCC患者的癌组织和对应癌旁组织标本，用免疫组织化学染色检测LAD1在ESCC组织中的表达并分析LAD1与ESCC组织病理特征的相关性。利用siRNA敲低KYSE-30和KYSE-150细胞中LAD1的表达，通过CCK-8实验、平板克隆实验、划痕愈合实验、 Transwell实验、流式细胞术检测ESCC细胞功能的变化。通过UCSC和JASPAR数据库预测可能调控LAD1的上游转录因子(transcription factors, TFs),并通过RT-qPCR和免疫组织化学染色验证其在ESCC细胞和组织中的表达。最后采用RT-qPCR实验和双萤光素酶实验验证转录因子与LAD1的调控关系。结果显示，相比于HET-1A细胞，LAD1在KYSE-30和KYSE-150细胞中高表达(P<0.01或P<0.001),与转录组测序结果一致。免疫组织化学结果显示，LAD1在ESCC中高表达，并与病理分化程度呈负相关(P<0.01或P<0.001)。敲低LAD1能抑制ESCC细胞增殖、迁移、侵袭并促进细胞凋亡(P<0.01或P<0.001)。UCSC和JASPAR数据库预测结合RT-qPCR实验和免疫组织化学染色推测KLF5、 EHF、 ELF3可能是LAD1的上游转录因子，利用RT-qPCR实验和双萤光素酶实验进一步验证，发现LAD1可能受到KLF5、 EHF、 ELF3的调控。本研究提示，LAD1在ESCC细胞和组织中高表达，并与病理分化程度相关联；敲低LAD1能抑制ESCC细胞增殖、迁移、侵袭能力，促进细胞凋亡；KLF5、 EHF、 ELF3是调节LAD1的上游转录因子。

关键词

食管鳞癌 / ladinin-1(LAD1) / 增殖 / 侵袭 / 凋亡