努比亚山羊(Capra nubiana)PROX1基因克隆及功能研究

刘雨帆; 邹菊红; 何海恩; 张叁保; 黄艳娜; 蒋钦杨

doi:10.13417/j.gab.043.001214

基因组学与应用生物学 ›› 2024, Vol. 43 ›› Issue (07) : 1214 -1224. DOI: 10.13417/j.gab.043.001214

努比亚山羊(Capra nubiana)PROX1基因克隆及功能研究

刘雨帆, 邹菊红, 何海恩, 张叁保, 黄艳娜, 蒋钦杨

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摘要

为了克隆努比亚山羊(Capra nubiana)同源异形盒转录因子1 (prospero-related homeobox protein 1,PROX1)基因和检测过表达PROX1基因对努比亚山羊骨骼肌成肌细胞分化和肌纤维类型转化相关基因mRNA表达的影响，为研究PROX1基因在骨骼肌发育中的调控作用提供参考，本研究以努比亚山羊背最长肌组织cDNA为模板克隆PROX1基因，构建pEGFP-N1-PROX1真核表达载体，转染至努比亚山羊骨骼肌成肌细胞，24 h后更换分化培养基，收集分化6 d的细胞，通过RT-qPCR检测过表达PROX1基因后细胞分化标志基因、 NOTCH信号通路相关基因以及骨骼肌肌纤维类型相关基因的表达情况。研究结果表明努比亚山羊PROX1基因编码区(coding sequence, CDS)序列长度为2 214 bp,编码含737个氨基酸的多肽。RT-qPCR结果表明PROX1基因可以通过抑制NOTCH信号通路，上调细胞分化标志基因表达水平进而促进成肌细胞的分化(P<0.05),并介导CaN/NFAT信号通路，显著下调MYH2和MYH4基因的mRNA表达水平(P<0.05)。本研究初步确定努比亚山羊PROX1基因参与调控骨骼肌成肌细胞的分化和肌纤维类型的转化，研究结果为进一步丰富肌肉生长发育的分子机制提供理论数据。