基于抗体融合荧光蛋白的镰刀菌免疫检测技术

闫瑜雪; 尚国富; 陈绍美; 喻艳琴; 胡祖权; 艾民; 彭晓燕

doi:10.13417/j.gab.043.001850

基因组学与应用生物学 ›› 2024, Vol. 43 ›› Issue (Z2) : 1850 -1858. DOI: 10.13417/j.gab.043.001850

基于抗体融合荧光蛋白的镰刀菌免疫检测技术

闫瑜雪, 尚国富, 陈绍美, 喻艳琴, 胡祖权, 艾民, 彭晓燕

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摘要

镰刀菌(Fusarium)是一类重要的植物病原菌和临床上常见的致病真菌，为实现镰刀菌的快速灵敏检测，本研究通过基因工程操作技术将编码抗镰刀菌单链抗体(single-chain variable fragment, scFv)FvSG7的基因与mNenoGreen (mNG)绿色荧光蛋白和NanoLuc (NLuc)荧光素酶基因构建融合表达载体，优化原核表达条件后进行大量表达纯化；利用SDS-PAGE和Western blot检测融合蛋白FvSG7-mNG-NL的表达情况；利用免疫荧光分析融合蛋白与镰刀菌菌丝的结合特性；利用酶联免疫吸附测定实验(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)分析融合蛋白与镰刀菌抗原的结合能力。结果显示，融合荧光蛋白FvSG7-mNG-NL的原核表达载体构建成功，并实现可溶性高效表达。FvSG7-mNG-NL保留单链抗体、荧光素酶以及荧光蛋白的活性，可通过生物发光共振能量转移(bioluminescence resonance energy transfer, BRET)增强发光成像。本研究为发展镰刀菌的灵敏快速免疫检测技术奠定了实验基础。