NECTIN1缺失在食管鳞癌发生和发展中的作用及其机制

摘要

本研究旨在探究黏连蛋白细胞黏附分子1(nectin cell adhesion molecule 1,NECTIN1)缺失对食管鳞癌(esophageal squamous cell carcinoma, ESCC)细胞发生和发展的影响及其分子作用机制。利用UCSC数据库分析食管癌(esophageal carcinoma, ESCA)中NECTIN1基因的线性拷贝数，通过Western blot和免疫组化染色分析NECTIN1在食管鳞癌细胞、食管鳞癌组织和癌旁组织中的蛋白水平。利用TISIDB数据库分析NECTIN1表达与食管癌临床特征的相关性。采用shRNA敲低NECTIN1在KYSE150和KYSE510细胞中的表达，利用CCK-8实验、克隆形成实验、细胞划痕和Transwell实验以及流式细胞术检测敲低NECTIN1对细胞功能的影响。对敲低NECTIN1的KYSE510细胞进行转录组测序，筛选差异表达基因；通过GO、 KEGG富集分析，探讨NECTIN1可能影响的信号调控网络。结果表明，NECTIN1在部分食管癌患者中拷贝数减少，蛋白水平显著低于癌旁组织的(P<0.000 1), NECTIN1低表达的食管鳞癌患者分化较差(P<0.000 1),与临床晚期分期呈负相关。敲低NECTIN1基因后KYSE150和KYSE510细胞增殖、迁移和侵袭能力均增强(P<0.05),细胞S期增多，并使细胞凋亡减少(P<0.01)。在KYSE150细胞中敲低NECTIN1,进行转录组测序分析后发现115个基因显著上调、 209个基因显著下调。KEGG分析表明，差异表达基因富集于肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor, TNF)信号通路(P<0.01),通过GEPIA数据库分析发现，在ESCA患者中，该通路中的3个基因(IL1B、TNFAIP3、CSF2)的表达水平与NECTIN1呈显著正相关(P<0.05),与转录组测序结果相符。NECTIN1的缺失促进了ESCC细胞增殖、迁移和侵袭，其机制可能是通过TNF信号通路发挥抑癌作用，调控ESCC的发生与发展。

关键词

黏连蛋白细胞黏附分子1(NECTIN1) / 食管鳞癌(ESCC) / 增殖 / 侵袭 / 肿瘤坏死因子(TNF)信号通路