PI4KB蛋白的多克隆抗体制备及其对禽传染性支气管炎病毒复制的影响

摘要

许多正链RNA病毒通过劫持宿主细胞的磷脂酰肌醇4-激酶β(phosphatidylinositol 4-kinase beta, PI4KB)来富集磷脂酰肌醇4-磷酸(phosphatidylinositol-4 phosphate, PI4P),进而促进病毒的复制。为探究PI4KB是否影响禽传染性支气管炎病毒(infectious bronchitis virus, IBV)的复制，本研究首次制备针对鸡源PI4KB蛋白的兔多克隆抗体，并通过间接ELISA和Western blot对获得的多克隆抗体进行鉴定；在此基础上，进一步过表达和干扰表达PIKB蛋白，以探究其对IBV复制的影响。结果显示，选择鸡源PI4KB蛋白第473～826位氨基酸作为原核表达序列，成功构建了原核表达质粒pCzn-1-PI4KB,表达出PI4KB蛋白并制备了多克隆抗体，ELISA结果显示制备的PI4KB兔多克隆抗体效价为1∶51 200, Western blot结果验证其具有良好的反应性和特异性，可用于细胞层面研究PI4KB对IBV复制的作用；将包含PI4KB功能结构域的编码区(coding sequence, CDS)作为真核表达序列，成功构建了真核表达质粒pVax-mCherry-PI4KB,并在BHK-21细胞中成功过表达PI4KB蛋白；相较于感染组和空载体感染组，过表达PI4KB后，IBV病毒载量、 N蛋白表达水平以及病毒滴度均显著提高(P<0.05);反之，干扰表达PI4KB后，IBV病毒载量、 N蛋白表达水平以及病毒滴度均显著降低。这表明过表达PI4KB能显著促进IBV的复制，而干扰表达PI4KB则能显著抑制IBV的复制。本研究为深入理解PI4KB的生物学功能以及探究IBV感染和致病新机制奠定了基础，同时为寻找IBV新的抗病毒药物靶点提供了理论依据以及新思路。

关键词

禽传染性支气管炎病毒 / PI4KB / 多克隆抗体