吡非尼酮通过降低乳腺癌细胞外基质沉积增加CD8⁺T细胞的浸润

摘要

本研究旨在探讨吡非尼酮（pirfenidone, PFD）能否通过降低乳腺癌细胞外基质（extracellular matrix, ECM）的沉积，从而改善其免疫微环境。本研究构建了4T1乳腺癌模型，并随机将其分为模型对照组（PBS灌胃处理）和PFD治疗组（PFD灌胃治疗）。采用马松染色和天狼星红染色检测肿瘤纤维化程度，用原子力显微镜检测肿瘤组织硬度，用免疫荧光染色检测肿瘤组织中CD8⁺T细胞的浸润以及α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin, α-SMA）和胶原蛋白的表达情况。在转化生长因子-β （transforming growth factor-β, TGF-β）将成纤维细胞诱导为癌相关成纤维细胞（cancer-associated fibroblasts, CAFs）的过程中，同时加入PFD处理细胞48 h,用实时定量PCR （real-time quantitative PCR, RT-qPCR）检测CAFs经典标志物α-肌动蛋白-2（actin alpha 2,ACTA2）、成纤维细胞特异性蛋白（fibroblast specific protein,FSP）、血小板反应蛋白-1（thrombospondin-1,THBS-1）的表达情况，同时采用免疫荧光检测成纤维细胞中α-SMA的表达情况。结果显示，在动物实验中，相较于模型对照组，PFD治疗组中的胶原纤维沉积显著减少，组织硬度降低，CD8⁺T细胞浸润明显增加，α-SMA和胶原蛋白的表达也显著下降。在细胞实验中，PFD能明显抑制TGF-β刺激成纤维细胞的ACTA2、FSP和THBS-1基因表达水平的上升，降低细胞中α-SMA的表达。因此，PFD能抑制CAFs的活性，降低乳腺癌ECM的沉积及肿瘤组织的硬度，增加CD8⁺ T细胞的浸润，改善乳腺癌的免疫微环境，表明PFD具有作为免疫治疗[如免疫检查点抑制剂（immune checkpoint inhibitors, ICIs）]辅助用药的潜能。

关键词

吡非尼酮 / 乳腺癌 / 细胞外基质(ECM)沉积 / 肿瘤相关成纤维细胞 / 免疫细胞浸润