奶牛肠道新型底盘菌的开发与工程菌的构建

吕园梦; 李晓悦; 王悦; 戴继鸿; 韩林; 葛文静; 胥欣瑶; 李霞; 胡圣伟; 李村院

doi:10.13417/j.gab.044.001121

基因组学与应用生物学 ›› 2025, Vol. 44 ›› Issue (11) : 1121 -1135. DOI: 10.13417/j.gab.044.001121

奶牛肠道新型底盘菌的开发与工程菌的构建

吕园梦, 李晓悦, 王悦, 戴继鸿, 韩林, 葛文静, 胥欣瑶, 李霞, 胡圣伟, 李村院

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摘要

基因工程菌(genetically engineered bacteria, GEB)凭借其强大的生物合成能力，可高效生产功能多样的生物活性物质以提升动物生产效率。本研究旨在构建高效分泌外源蛋白的工程菌。采用有限稀释法并结合毒力基因鉴定、溶血实验和药敏实验从健康奶牛粪便中分离并筛选出潜在的底盘大肠杆菌(Escherichia coli)E28。通过引入透明质酸钠水解酶基因HGM117和信号肽pelB对低拷贝质粒pBAD进行改造，获得重组质粒pBAD-pelB-HGM117;分别将重组质粒转化至益生大肠杆菌Nissle 1917(Escherichia coli Nissle 1917, EcN)和候选底盘菌E28。利用SDS-PAGE证实了该质粒的胞外分泌表达能力，基于DNS法的酶活力测定结果表明新型工程菌E28分泌表达的蛋白酶活力显著高于EcN的。本研究成果为畜牧业生物制剂的开发提供了新的模式，同时为其他重要经济家畜底盘菌的开发提供参考。