溶藻弧菌TPI蛋白的三种N-ε-赖氨酸修饰与耐药的关联性分析

摘要

溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)引发的弧菌病对水产养殖行业造成了重大威胁，为研究其耐药机制与蛋白翻译后修饰(post-translational modifications, PTMs)的关系，本研究鉴定了溶藻弧菌磷酸丙糖异构酶(triosephosphate isomerase, TPI)的N-ε-赖氨酸乙酰化、琥珀酰化、丙二酰化修饰，发现TPI蛋白PTMs及其表达量在溶藻弧菌野生株和耐药株间的差异。通过实时定量PCR(real-time quantitative PCR, RT-qPCR)和蛋白质免疫印迹法(Western blot, WB)测定溶藻弧菌野生株(HY9901)、氟苯尼考耐药株(FBNK)和恩诺沙星耐药株(ENSX)的tpiA基因相对表达量和蛋白表达量。通过WB鉴定TPI天然蛋白的N-ε-赖氨酸乙酰化、琥珀酰化、丙二酰化修饰并分析其与耐药的关系。RT-qPCR的结果显示，与HY9901相比，在FBNK中tpiA基因的mRNA表达量下调(P<0.01), ENSX中的则上调(P<0.01)。WB结果也证明，与HY9901相比，TPI蛋白在FBNK中的表达量下调，在ENSX中的表达量上调。进一步研究发现，HY9901、 ENSX和FBNK的TPI天然蛋白均具有乙酰化、琥珀酰化、丙二酰化修饰。与HY9901相比，ENSX、 FBNK中的TPI蛋白乙酰化水平降低但琥珀酰化水平升高；ENSX的TPI蛋白丙二酰化修饰水平升高，而FBNK的修饰水平降低。溶藻弧菌野生株和耐药菌株中tpiA的表达量与耐药相关，TPI天然蛋白的N-ε-赖氨酸乙酰化、琥珀酰化、丙二酰化修饰水平存在差异，表明这三种N-ε-赖氨酸修饰与溶藻弧菌的耐药有关。

关键词

溶藻弧菌 / 磷酸丙糖异构酶 / 蛋白翻译后修饰 / 耐药