Aβ42刺激PC12细胞的效应与5×FAD转基因AD鼠原代嗜铬细胞的分离及其钙流信号的研究

摘要

阿尔茨海默病（Alzheimer′s disease,AD）是一种慢性神经退行性疾病，毒性较强的β-淀粉样蛋白42（amyloid β-protein 42,Aβ42）单体寡聚后在AD发病机制中发挥重要作用。永生化的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞系PC12（rat pheochromocytoma cell,PC12）具有神经表型和内分泌表型的双重潜能，是研究AD等神经疾病的重要工具，而钙稳态失衡会引发一系列钙依赖的病理反应，从而影响AD的进展。本研究将不同初始浓度的Aβ42寡聚化处理后孵育PC12细胞，用细胞计数试剂盒-8（cell counting kit-8,CCK-8）法检测其增殖率，使用高通量实时荧光检测分析系统（high-throughput real-time fluorescent imaging plate reader,FLIPR）检测经最适原始浓度Aβ42孵育后的PC12细胞钙离子(calcium ions,Ca²⁺)内流变化。采用酶消化法分离携带5个家族性基因突变的AD转基因模型小鼠（transgenic mice with five familial Alzheimer′s disease,5×FAD）及野生型小鼠（wild type,WT）的肾上腺髓质嗜铬细胞，构建原代细胞模型，使用FLIPR检测5×FAD、WT小鼠原代肾上腺嗜铬细胞内钙离子流变化，应用于AD机制研究。实验结果表明，10μmol/L、24 h为Aβ42寡聚体孵育PC12细胞的最适初始浓度及孵育时间，且不同原始浓度Aβ42对PC12细胞增殖抑制率不同；钙荧光结果显示Aβ42寡聚体孵育PC12细胞后Ca2+内流明显增强，而AD小鼠原代肾上腺嗜铬细胞Ca²⁺内流高于WT小鼠。综上所述，10μmol/L Aβ42寡聚体孵育24 h可以刺激PC12细胞钙离子内流信号增强并影响细胞增殖，同时AD小鼠原代肾上腺嗜铬细胞表现出更强的钙内流信号，提示AD病理中存在钙离子信号的过度激活。

关键词

阿尔茨海默病 / 肾上腺嗜铬细胞 / 原代细胞 / 钙离子