白木香AsPKS4互作蛋白的筛选和鉴定分析

摘要

白木香(Aquilaria sinensis)形成沉香的过程伴随着2-(2-苯乙基)色酮类化合物的积累。研究表明，白木香聚酮合酶AsPKSs是2-(2-苯乙基)色酮类化合物合成通路中的关键酶。本研究克隆了AsPKS4基因，利用生物信息学方法对其理化性质、蛋白质结构、亚细胞定位进行分析;利用酵母双杂交筛库从白木香c DNA库中筛选AsPKS4的互作蛋白，分析注释筛选到的互作蛋白并克隆互作蛋白As KIN10的CDS序列进行酵母双杂交点对点验证。生物信息学分析结果显示，AsPKS4为亲水蛋白，无信号肽，无跨膜结构，含有Cys-His-Asn催化三联体，存在30个磷酸化位点;酵母双杂交筛库筛选到7个AsPKS4的互作蛋白，包括PTS1的受体蛋白PEX5、隔膜定位蛋白MinD、热激蛋白DJB13L、转录因子LSH10、SnRK1的α亚基KIN10以及两个未表征的蛋白;酵母双杂交进一步验证了As KIN10与AsPKS4之间的蛋白相互作用;对As KIN10进行的亚细胞定位实验表明其定位在细胞质和细胞核。综合实验结果显示本研究为AsPKS4筛选到了7个互作蛋白，为解析沉香2-(2-苯乙基)色酮的合成通路和调控机制的研究奠定了基础。

关键词

沉香 / 2-(2-苯乙基)色酮 / AsPKS4 / 蛋白互作