山金柑FhMKK9基因克隆、表达及功能的初步鉴定

代文婧; 肖璇

doi:10.13417/j.gab.045.000586

基因组学与应用生物学 ›› 2026, Vol. 45 ›› Issue (3) : 586 -599. DOI: 10.13417/j.gab.045.000586

山金柑FhMKK9基因克隆、表达及功能的初步鉴定

代文婧, 肖璇

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摘要

丝裂原活化蛋白激酶激酶9（mitogen-activated protein kinase kinase 9, MKK9）作为丝裂原活化蛋白激酶（mitogenactivated protein kinase, MAPK）级联通路成员,在调控植物抗逆胁迫中具有重要作用。为研究山金柑（Fortunella hindsii）FhMKK9基因在柑橘溃疡病抗性中的功能,本研究以山金柑叶片c DNA为模板,克隆获得Fh MKK9基因CDS（coding sequence）全长序列,其开放阅读框（open reading frame, ORF）为972 bp,编码323个氨基酸残基。保守结构域分析表明, Fh MKK9具有MAPKK家族特有的PKc＿MAPKK＿Plant-like蛋白激酶结构域序列。系统发育分析显示,山金柑Fh MKK9蛋白与芸香科（Rutaceae）其他物种同源蛋白亲缘关系较近。启动子顺式作用元件预测显示,其启动子区含多个光信号及激素信号响应元件。亚细胞定位结果表明, Fh MKK9蛋白定位于细胞膜和细胞核中。组织特异性RT-qPCR结果显示, Fh MKK9基因在山金柑叶片中表达量最高,在根和茎中也有较高表达,表明其可能在山金柑叶片中发挥更为重要的作用。柑橘溃疡菌（Xanthomonas axonopodis pv. citri, Xac）侵染可诱导山金柑叶片中Fh MKK9基因显著上调表达。外源乙烯利处理浓度低于50 mg^/L时, FhMKK9基因的表达与乙烯利浓度呈正相关。瞬时表达Fh MKK9基因可增强感病种质‘纽荷尔’脐橙（Citrus sinensis Osbeck′Newhall′）叶片对溃疡病的抗性。本研究表明Fh MKK9基因可能通过乙烯信号通路正向调控山金柑对柑橘溃疡病的抗性,为柑橘抗病育种提供了候选基因。