蛇毒类凝血酶agkihpin在大肠杆菌中可溶性表达的优化策略

姚家丽; 韦燕宁; 杨宇佳; 蒋媛媛; 王琳; 胡启平

doi:10.13417/j.gab.045.000782

基因组学与应用生物学 ›› 2026, Vol. 45 ›› Issue (3) : 782 -793. DOI: 10.13417/j.gab.045.000782

蛇毒类凝血酶agkihpin在大肠杆菌中可溶性表达的优化策略

姚家丽, 韦燕宁, 杨宇佳, 蒋媛媛, 王琳, 胡启平

作者信息 +

Author information +

文章历史 +

摘要

蛇毒类凝血酶agkihpin是从浙江蝮蛇毒腺中分离得到的一种蛇毒精氨酸酯酶,其具有类凝血酶活性,同时具有抗肿瘤浸润和转移等多种功效。然而,天然蛇毒中的agkihpin含量低,分离纯化成本高且难度大。在前期研究中,本课题组已运用分子克隆技术,可持续地开发利用蛇毒资源,但表达出的agkihpin主要以包涵体形式存在,蛋白溶解性和酶活性低。基于此,本研究通过优化诱导温度、表达宿主胞内环境等条件,在大肠杆菌(Escherichia coli)中构建了agkihpin与促溶标签及分子伴侣的联合表达系统。结果发现,融合麦芽糖结合蛋白(maltose-binding protein, MBP)标签的重组体系未检测到agkihpin的表达;在菌株BL21trxB(DE3)中,融合硫氧还蛋白A(thioredoxin A, Trx A)标签实现了agkihpin的可溶性表达;共表达5种分子伴侣均能不同程度地提高agkihpin的可溶性,其中p Tf16的促溶效果最为突出,成功实现了agkihpin重组蛋白的经济、可持续表达,为agkihpin后期的蛋白水平研究奠定了重要基础,同时也对agkihpin在溶栓、镇痛、抗高发恶性肿瘤等方面的应用研究具有重要意义。