枸杞多糖经GPX4/AIF通路修复小鼠睾丸间质细胞氧化应激损伤的研究

摘要

目的 探究枸杞多糖（LBP）对氧化应激损伤小鼠睾丸间质（TM3）细胞的修复作用及分子机制。方法 使用H₂O₂诱导TM3细胞构建氧化应激TM3细胞模型，分为Control组、H₂O₂组、LBP 400 mg·L^-1+H₂O₂（L-LBPH₂O₂）组、LBP 800 mg·L^-1+H₂O₂（M-LBP-H₂O₂）组、LBP 1 500 mg·L^-1+H₂O₂（H-LBP-H₂O₂）组。使用shRNA慢病毒构建sh-GPX4 TM3细胞模型，分为Control组、H₂O₂组、sh-GPX4组、H₂O₂sh-GPX4组、L-LBP-H₂O₂sh-GPX4组、M-LBP-H₂O₂sh-GPX4组、H-LBP-H₂O₂sh-GPX4组。检测谷胱甘肽（GSH）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）含量，分析LBP的抗氧化作用。Hoechst/PI双染法检测细胞凋亡，并检测乳酸脱氢酶（LDH）含量，分析LBP的抗凋亡作用。使用Western blot检测细胞内谷胱甘肽过氧化物酶4（GPX4）、凋亡诱导因子（AIF）的表达并通过免疫荧光检测AIF定位，研究LBP修复氧化应激损伤的分子机制。结果 与H₂O₂组相比，LBP各组细胞MDA含量均降低（P均<0.001）,GSH、SOD含量均升高（P均<0.001）；与Control组相比，sh-GPX4组MDA含量升高（P<0.001）,GSH含量降低（P<0.001）；与H₂O₂sh-GPX4组相比，LBP-H₂O₂sh-GPX4各组细胞内MDA含量均降低（P均<0.001）,GSH、SOD含量均升高（P均<0.01）；与H₂O₂组相比，LBP各组凋亡细胞减少且LDH含量降低（P均<0.001）；与H₂O₂组相比，L-LBP-H₂O₂组、M-LBP-H₂O₂组细胞质中的GPX4表达均提高（P均<0.001），细胞核内AIF表达均降低（P均<0.001）。结论 LBP可通过GPX4/AIF信号通路修复TM3细胞氧化应激损伤。

关键词

枸杞多糖 / 氧化应激 / 谷胱甘肽过氧化物酶4 / 凋亡诱导因子