miR-660-5p通过靶向ZBTB4/HK2轴对肝癌细胞增殖、迁移、侵袭与糖酵解的影响

摘要

目的 探究miR-660-5p/ZBTB4/HK2轴在肝癌细胞增殖、迁移、侵袭和糖酵解中的作用。方法 选择人正常肝上皮THLE-2细胞和肝癌Huh-7、MHCC97H、HepG2细胞，验证ZBTB4表达水平。在ZBTB4表达水平适中的肝癌细胞中转染ZBTB4过表达载体或siRNA，使用CCK-8、Transwell侵袭、划痕、乳酸生成和葡萄糖摄取实验检测细胞增殖、迁移、侵袭能力和糖酵解水平。在转染ZBTB4过表达载体的肝癌细胞同时联合HK2过表达载体共转染，验证ZBTB4调控HK2介导糖酵解。通过双荧光素酶实验检测miR-660-5p与ZBTB4的靶向关系，并在细胞中共转染miR-660-5p inhibitor和ZBTB4 siRNA，验证miR-660-5p对ZBTB4的调控作用。结果 ZBTB4在3种肝癌细胞中的mRNA和蛋白表达均低于THLE-2细胞（P均<0.01），其在MHCC97H细胞中表达适中。与Vector组相比，ZBTB4 OE组ZBTB4C mRNA和蛋白表达均上调、HK2表达均下调（P均<0.05）,24 h、48 h和72 h细胞OD值均降低（P均<0.05），迁移率、侵袭细胞数、乳酸含量和葡萄糖摄取量均减少（P均<0.05）。与过表达ZBTB4相比，干扰ZBTB4后MHCC97H细胞的迁移率、侵袭细胞数、乳酸含量和葡萄糖摄取量均升高（P均<0.05）。进一步，在转染ZBTB4过表达载体的同时共转染HK2过表达载体，HK2表达上调，迁移率、侵袭细胞数、细胞OD值、乳酸含量和葡萄糖摄取量均上调（P均<0.05）。双荧光素酶实验证实ZBTB4是miR-660-5p的靶基因（P<0.01），而共转染miR-660-5p inhibitor和ZBTB4 siRNA后，ZBTB4表达下调、HK2表达上调，细胞OD值、侵袭细胞数和乳酸含量均上调（P均<0.05）。结论 miR-660-5p通过调控ZBTB4/HK2轴促进肝癌细胞增殖、迁移、侵袭和糖酵解水平。

关键词

肝癌 / miR-660-5p / 锌指和BTB结构域4 / 糖酵解