黑枸杞花青素通过Wnt/β-catenin信号通路改善人脂肪源性血管外膜细胞氧化损伤支持造血干/祖细胞体外扩增的研究

摘要

目的 探讨黑枸杞花青素（ALRM）通过Wnt/β-catenin信号通路改善人脂肪源性血管外膜细胞（CD146⁺hAD-PCs）氧化损伤支持脐血造血干/祖细胞（UCB CD34⁺HSPCs）体外扩增的作用机制。方法 建立H₂O₂诱导CD146⁺hAD-PCs氧化损伤模型，分为对照组、H₂O₂组、ALRM+H₂O₂组、CHIR-99021+H₂O₂组、DKK1+ALRM+H₂O₂组。RT-qPCR及Western blot检测Wnt/β-catenin信号通路相关因子的mRNA、蛋白相对表达水平；流式细胞术检测细胞凋亡；荧光显微镜检测活性氧（ROS）水平。建立CD146⁺hAD-PCs和UCB CD34⁺HSPCs体外共培养体系，分为共培养对照组、H₂O₂共培养组、ALRM+H₂O₂共培养组、CHIR-99021+H₂O₂共培养组，共培养1、2、4周后，比较各组UCB CD34⁺HSPCs增殖情况和集落形成能力。结果 H₂O₂诱导CD146⁺hAD-PCs氧化损伤，ALRM+H₂O₂组β-catenin、Cyclin D1 mRNA以及β-catenin蛋白相对表达水平较H₂O₂组均升高（P均<0.01）;ALRM+H₂O₂组和CHIR-99021+H₂O₂组细胞凋亡率和ROS水平较H₂O₂组均降低（P均<0.01），而DKK1+ALRM+H+₂O₂组较ALRM+HH₂O₂组升高（P均<0.05）。UCB CD34⁺HSPCs数量变化：在共培养1、2、4周时，H₂O₂共培养组UCB CD34⁺HSPCs数量均低于共培养对照组、ALRM+H₂O₂共培养组和CHIR-99021+H₂O₂共培养组（P均<0.01）。UCB CD34⁺HSPCs集落形成能力：在共培养1、2、4周时，H₂O₂共培养组集落形成单位数量均低于共培养对照组和ALRM+H₂O₂共培养组，均高于CHIR-99021+H₂O₂共培养组（P均<0.01）。结论 ALRM可能通过调控Wnt/β-catenin信号通路，抑制H₂O₂诱导的CD146⁺hAD-PCs凋亡和ROS积累，改善基质细胞（CD146⁺hAD-PCs）氧化损伤，进而支持与CD146⁺hAD-PCs共培养的UCB CD34⁺HSPCs体外扩增。

关键词

造血干/祖细胞 / 氧化应激 / 人脂肪源性血管外膜细胞 / Wnt/β-catenin信号通路 / 黑枸杞花青素