糖蛋白非转移性黑色素瘤蛋白B对同型半胱氨酸诱导的巨噬细胞自噬的作用

摘要

目的 研究糖蛋白非转移性黑色素瘤蛋白B（Gpnmb）在同型半胱氨酸（Hcy）抑制巨噬细胞自噬的作用。方法 佛波酯（PMA）诱导人髓系白血病单核(THP^-1)细胞分化为巨噬细胞，经100μmol·L^-1 Hcy干预24 h。Lipofectamine^TM2000转染Gpnmb过表达或干扰载体，分为Control组、Hcy组、过表达对照组或过表达对照+Hcy组、Gpnmb过表达组或Gpnmb过表达+Hcy组、干扰对照组或干扰对照+Hcy组、Gpnmb干扰组或Gpnmb干扰+Hcy组。RT-qPCR、Western blot和免疫荧光技术检测Gpnmb及自噬相关蛋白(p62、LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin^-1)的表达。结果 Hcy干预后THP^-1源性巨噬细胞自噬水平降低，表现为p62蛋白水平升高（P<0.01）,LC3Ⅱ/Ⅰ与Beclin^-1蛋白水平均降低（P均<0.05），同时Hcy促进Gpnmb的表达（P<0.01）。干扰Gpnmb可减轻Hcy介导的巨噬细胞自噬水平降低，表现为p62蛋白水平降低（P<0.01）,LC3Ⅱ/Ⅰ与Beclin^-1蛋白水平升高（P均<0.01）;Gpnmb过表达则发生相反的变化（P均<0.01）。结论 Hcy引起THP^-1源性巨噬细胞Gpnmb表达上调可能是其抑制细胞自噬的机制之一。

关键词

同型半胱氨酸 / 糖蛋白非转移性黑色素瘤蛋白B / 巨噬细胞 / 自噬