超生理剂量雄激素通过AR/AR-V7信号通路抑制去势抵抗性前列腺癌细胞增殖的机制研究

摘要

目的 探讨超生理剂量雄激素通过抑制雄激素受体（AR）和雄激素受体剪接变异体7（AR-V7）进而抑制去势抵抗性前列腺癌细胞增殖的分子机制。方法 以前列腺癌C4-2B细胞系及通过其构建的MDV3100耐药株MDVR为研究对象。使用siRNA瞬时转染小干扰技术，构建si-AR细胞模型，CCK-8法和克隆形成实验检测两株细胞对MDV3100的耐药性及细胞增殖能力差异。Hoechst 33258染色、流式细胞术分析细胞凋亡水平。Western blot检测PI3K/AKT通路关键蛋白、AR、AR-V7以及凋亡相关蛋白表达。结果 与亲代C4-2B细胞相比，MDVR细胞对MDV3100的耐受性升高（P<0.01）。双氢睾酮（DHT）在0.125～32 ng·mL^-1浓度范围内呈剂量依赖性抑制两种细胞的增殖活性（P<0.05），根据IC50值确定1和2 ng·mL^-1 DHT为后续实验浓度。细胞功能学结果表明，1和2 ng·mL^-1 DHT处理可降低细胞克隆形成率（P均<0.05），同时Hoechst33258染色显示核固缩增加，流式细胞术检测凋亡率升高（P<0.05）。Western blot分析显示，DHT处理后p-PI3K、pAKT、AR及AR-V7以及前列腺特异性抗原（PSA）的蛋白相对表达量均降低（P均<0.05）。PI3K/AKT通路抑制剂渥曼青霉素（WM）可协同增强DHT对上述蛋白的抑制作用，而激动剂740Y-P则部分逆转DHT的调控效应（P<0.05）。通过siRNA成功沉默AR表达后，促凋亡蛋白Bax相对表达量降低，而抗凋亡蛋白Bcl-2相对表达量升高（P均<0.05）。结论 超生理剂量雄激素通过抑制PI3K/AKT磷酸化及AR/AR-V7表达，显著抑制前列腺癌细胞增殖并诱导凋亡。

关键词

超生理剂量雄激素 / 前列腺癌 / 雄激素受体 / 凋亡