IWR1对Astrocytes/Microglia共培养细胞炎性激活及其阳性PD-1、Wnt3a表达的作用

摘要

目的 探究Wnt抑制剂（IWR1）对脂多糖（LPS）致体外共培养Astrocytes/Microglia细胞炎性激活的影响及程序性死亡受体1（PD-1）和Wnt3a的阳性表达情况。方法 应用LPS在体外共培养Astrocytes/Microglia细胞建立炎性细胞模型，实验分为正常对照（Con）组、LPS组、干预(5μmol·L^-1IWR1、10μmol·L^-1IWR1、LPS+5μmol·L^-1IWR1、LPS+10μmol·L^-1IWR1)组。倒置相差显微镜下观察细胞生长情况的同时，应用CCK-8进行细胞活力的测定、免疫荧光染色观察PD-1和Wnt3a的阳性表达情况、Western blot法测定PD-1和Wnt3a的蛋白相对表达量变化情况。结果 在正常体外共培养Astrocytes/Microglia细胞上，免疫荧光染色结果发现，GFAP阳性细胞百分比约55.2%,IBA1阳性细胞占比约44.8%,PD-1在小胶质细胞胞膜上表达，Wnt3a主要在星形胶质细胞胞核上表达。CCK-8细胞活力检测结果显示，在LPS(100 ng·mL^-1)和（或）IWR1(5、10μmol·L^-1)作用下，与Con组相比，LPS组细胞活性增高（P<0.01），干预组(5μmol·L^-1IWR1组、10μmol·L^-1IWR1组、LPS+5μmol·L^-1IWR1组、LPS+10μmol·L^-1IWR1组)细胞活性降低（P<0.05或P<0.001）。免疫荧光结果显示，与Con组相比，LPS组小胶质细胞上表达的PD-1的阳性细胞数增加，干预组(5μmol·L^-1IWR1组、10μmol·L^-1IWR1组、LPS+5μmol·L^-1IWR1组、LPS+10μmol·L^-1IWR1组)中PD-1阳性细胞数减少，且各组Wnt3a的阳性细胞数均减低（P<0.05）。Western blot结果显示，与Con组相比，LPS组中PD-1表达上调（P<0.05）、Wnt3a表达下调（P<0.01），干预组(5μmol·L^-1IWR1组、10μmol·L^-1IWR1组、LPS+5μmol·L^-1IWR1组、LPS+10μmol·L^-1IWR1组)PD-1表达呈现递减趋势（P<0.05或P<0.01）、Wnt3a表达呈递增趋势（P<0.05或P<0.01）。结论 应用LPS能够成功建立Astrocytes/Microglia细胞炎性模型，在IWR1的作用下，可以抑制Astrocytes/Microglia细胞炎性激活的反应，Wnt信号可能参与脑内神经炎症的调控机制。

关键词

Wnt抑制剂(IWR1) / 炎性激活 / 程序性死亡受体1 / Wnt3a信号