Piezo2调控RhoA-Cofilin信号通路对人结直肠癌细胞HCT116和SW620增殖、迁移和侵袭的影响

摘要

目的 明确Piezo2在结直肠癌组织中的表达水平，探讨Piezo2调控RhoA-Cofilin通路对人结直肠癌细胞株HCT116和SW620增殖、迁移及侵袭的影响。方法 采用免疫组织化学技术检测结直肠癌组织、癌旁组织、正常肠上皮组织中Piezo2的表达；采用CCK-8法检测HCT116和SW620细胞中Piezo2抑制剂钌红的IC₅₀；流式细胞术检测钌红抑制后HCT116和SW620细胞内的Ca²⁺浓度变化；Western blot检测钌红抑制后SW620细胞中的血管内皮生长因子（VEGF）、Yes相关蛋白（YAP）、基质金属蛋白酶2（MMP-2）、波形蛋白（Vimentin）、β-连环蛋白（β-catenin）等转移侵袭蛋白的表达；通过稳定转染敲低Piezo2和敲低Piezo2且过表达RhoA慢病毒载体的HCT116和SW620细胞，以正常HCT116和SW620细胞为对照组，使用蛋白免疫印迹检测转染后SW620细胞Piezo2、Ras同源家族成员A（RhoA）、Rho关联激酶（ROCK）、LIM结构域激酶（LIMK）、Cofilin通路蛋白及VEGF、YAP、MMP-2、Vimentin、β-catenin等转移侵袭蛋白的表达；采用CCK-8、划痕修复实验和Transwell分别检测转染后HCT116和SW620细胞的增殖、迁移及侵袭能力。结果 癌组织中Piezo2的表达高于癌旁组织和正常组织（P<0.001）;HCT116细胞中钌红IC₅₀的95%可信区间为（3.119～5.222）×10^-3g·L^-1,SW620细胞中钌红IC₅₀的95%可信区间为（4.521～6.578）×10^-3g·L^-1;HCT116和SW620细胞在被钌红抑制Piezo2表达后，与对照组相比，细胞内Ca²⁺降低（P<0.001）;SW620细胞在被钌红抑制后，与对照组相比，VEGF、YAP、MMP-2、Vimentin、β-catenin蛋白表达均降低（P均<0.05）；与正常组相比，敲低Piezo2并过表达RhoA后SW620细胞的RhoA、ROCK、LIMK、Cofilin通路蛋白及VEGF、YAP、MMP-2、Vimentin、β-catenin等转移侵袭蛋白的表达均升高（P均<0.05）；与正常组相比，敲低Piezo2可以降低HCT116和SW620细胞的增殖、迁移和侵袭能力，而敲低Piezo2并过表达RhoA可以提高HCT116和SW620细胞的增殖、迁移和侵袭能力（P均<0.01）。结论 Piezo2在结直肠癌中高表达，沉默Piezo2可以通过调节Ca²⁺水平来降低HCT116和SW620细胞的增殖、迁移及侵袭能力，其机制可能与RhoA-Cofilin信号通路有关。

关键词

结直肠癌 / Piezo2 / RhoA-Cofilin信号通路 / 增殖 / 迁移 / 侵袭