Piezo2调控Ca²⁺影响RhoA信号通路在结直肠癌细胞侵袭与转移中的研究

摘要

目的 探讨Piezo2通过调节Ca²⁺内流调控RhoA信号通路，从而影响结直肠癌细胞侵袭与转移的分子机制。方法 采用Western blot法检测Piezo2在正常肠上皮细胞NCM460与结直肠癌细胞HCT116和SW620的表达情况；在HCT116和SW620细胞系中稳定转染Piezo2敲低慢病毒载体，并通过Western blot法验证敲低结果；采用细胞划痕实验和Transwell侵袭实验检测敲低Piezo2后对HCT116和SW620细胞迁移和侵袭能力的影响；采用免疫共沉淀法（CO-IP）分析HCT116细胞中敲低Piezo2与RhoA蛋白的相互作用；通过细胞流式检测敲低Piezo2后HCT116和SW620细胞内Ca²⁺浓度变化；并用Western blot检测CaN/NFAT1信号通路及其侵袭转移相关蛋白的表达变化。结果 Western blot结果显示，Piezo2在HCT116和SW620细胞中的表达均高于正常肠上皮细胞NCM460（P均<0.01）；在HCT116与SW620细胞内成功敲低Piezo2表达；细胞划痕及侵袭实验表明，敲低Piezo2表达可以抑制HCT116和SW620细胞的迁移和侵袭能力（P均<0.01）;CO-IP结果证实，Piezo2与RhoA存在相互作用关系，在HCT116细胞中敲低Piezo2后共沉淀复合物中RhoA蛋白含量降低（P<0.05）；流式细胞术结果显示，敲低Piezo2表达可抑制HCT116和SW620细胞Ca²⁺内流（P均<0.01），同时CaN/NFAT1信号通路及其下游效应蛋白相对表达量均下调（P均<0.01）。结论 Piezo2通过介导Ca²⁺内流激活RhoA信号通路，促进结直肠癌细胞侵袭和迁移，提示其可作为潜在治疗靶点。

关键词

结直肠癌 / 压电型机械敏感离子通道组件2 / Ras同源家族成员A / 钙离子